愈痫灵颗粒剂对致痫大鼠海马神经元Ca2+-CaM-CaMKⅡα信号通路的影响

论文题目: 愈痫灵颗粒剂对致痫大鼠海马神经元Ca2+-CaM-CaMKⅡα信号通路的影响

论文类型: 硕士论文

论文专业: 中西医结合基础

作者: 张晓霞

导师: 王净净

关键词: 癫痫,愈痫灵颗粒剂,表达

文献来源: 湖南中医药大学

发表年度: 2005

论文摘要: 目的:研究以化瘀通络法为主要组方原则的愈痫灵颗粒剂对戊四氮（Pentylenetetrazol,PTZ）致痫大鼠海马组织钙离子-钙调蛋白-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+-CaM-CaMKⅡα)信号通路的影响。方法:从70只健康SD大鼠中随机抽取9只作为正常组,其余以PTZ慢性点燃造成癫痫大鼠模型,再从造模成功的大鼠中随机抽取36只,按随机原则分为4组:模型组（model）、丙戊酸钠（VPA）组、愈痫灵颗粒剂（YXL）组和尼莫地平（NIM）组,观察药物干预后点燃大鼠的行为、脑电;采用Fura-2/AM法测定海马神经元突触体内Ca2+浓度([Ca2+]i);采用实时荧光半定量RT-PCR技术检测海马组织CaM和CaMKⅡα的mRNA表达水平:图像自动分析系统进行其吸光度扫描。结果:1.与模型组比较,愈痫灵颗粒剂可有效延长慢性点燃大鼠的癫痫发作潜伏期,减少发作持续时间,改善脑电异常放电频率与波幅（P＜0.05,P＜0.01）;2.与模型组比较,愈痫灵颗粒剂组可降低海马神经元突触体内[Ca2+]i（P＜0.05）;3.与模型组比较,愈痫灵颗粒剂可降低点燃大鼠海马组织内CaMmRNA的表达、升高CaMKⅡmRNA的表达（P＜0.05）。结论:愈痫灵颗粒剂通过调控Ca2+信号转导途径中的某些靶位点,使PTZ点燃大鼠海马区Ca2+-CaM-CaMKⅡα信号途径的变化趋于正常,从而抑制神经系统的兴奋性增强,使癫痫发作得以控制。

论文目录:

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英文摘要

引言

第一部分 材料与方法

1.实验材料

1.1 实验动物

1.2 受试药物

1.3 仪器与试剂

2.实验方法

2.1 实验动物分组方法

2.2 癫痫模型制作方法

2.3 癫痫发作异常行为观察方法

2.4 实验动物给药方法

2.4.1 药物剂量换算方法

2.4.2 给药途径与时间

2.5 脑电图描记与分析方法

2.6 脑组织处理方法

2.7 海马神经元突触体[Ca~(2+)]i测定

2.7.1 突触体制备

2.7.2 Fura-2负载

2.7.3 荧光检测

2.8 海马神经元CaM和CaMKⅡα的mRNA表达的测定

2.8.1 海马细胞总RNA的提取

2.8.2 RNA电泳分析

2.8.2.1 琼脂糖凝胶的制备

2.8.2.2 点样及电泳

2.8.3 RNA定量和纯度鉴定分析

2.8.4 RT-cDNA合成

2.8.5 PCR

2.8.5.1 PCR引物

2.8.5.2 PCR反应

3.统计学处理方法

第二部分 结果与分析

1.行为学改变

1.1 惊厥潜伏期比较

1.2 惊厥时间比较

2.脑电图改变

2.1 脑电频率变化比较

2.2 脑电波幅变化比较

3.海马神经元突触体[Ca~(2+)]i比较(属前期研究结果)

4.实时荧光半定量RT-PCR检测结果

4.1 各组海马细胞总RNA的提取结果

4.2 各组海马细胞RNA定量和纯度鉴定结果

4.3 各组海马细胞GAPDHmRNA表达比较

4.4 海马神经元CaM mRNA表达的比较

4.5 海马神经元CaMKⅡαmRNA表达的比较

第三部分 讨论

1.祖国医学有关癫痫论著读思

1.1 关于病名

1.2 关于病因病机及证候特点

1.3 关于疾病病理演变

2.现代医学有关Ca~(2+)信使系统与癫痫关系概要

2.1 细胞Ca~(2+)的分布和调节

2.2 Ca~(2+)内流是癫痫病发作的基本条件

2.3 CaM和CaMKⅡα信号转导异常是癫痫发作的重要环节

3.导师学术思想撷析

3.1 临床治疗谨尊衷中参西之理

3.1.1 钙通道拮抗剂与癫痫

3.1.2 中药的类"钙拮抗剂"作用

3.2 愈痫灵方的创立

3.3 阳性对照药物的选择

4.实验结果微探

4.1 行为观察和脑电检测结果探讨

4.2 海马细胞总RNA的提取结果探讨

4.3 海马细胞内[Ca~(2+)]i、CaM和CaMKⅡα的mRNA表达结果探讨

4.3.1 抑制钙离子内流是愈痫灵颗粒剂治疗癫痫的重要机制

4.3.2 调控CaM和CaMKⅡα是愈痫灵颗粒剂治疗癫痫的重要途径

4.4 总结

5.研究展望

结论

致谢

参考文献

附录

脑电图片

RT-PCR图片

攻读硕士学位期间发表的主要学术论文

发布时间: 2009-10-21

参考文献

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