论文摘要
本实验的目的是探讨IL-15在哮喘中的作用以及干预IL-15后对哮喘的影响。首先利用Ambion软件根据siRNA的设计原则,设计并合成21nt碱基序列IL-15-siRNA,利用pSIREN-RetroQ-ZsGreen构建合成了重组质粒pSIREN-RetroQ-ZsGreen-IL-15-siRNA（以下简称为pSRZsi-IL-15）,应用阳离子脂质体Lipofectamine 2000做为转染载体,特异性的阻断哮喘小鼠模型肺组织中IL-15 mRNA的表达水平,采用逆转录聚合酶链反应、酶联免疫反应、共聚焦显微镜、组织形态学和免疫组织化学等技术;研究了pSRZsi-IL-15-Lip对体外T细胞中的基因沉默效应和特异性;进而根据体外转染的数据,进行呼吸道体内转染pSRZsi-IL-15-Lip;对哮喘模型肺部炎症和支气管肺泡灌洗液中嗜酸粒细胞、中性粒细胞计数、血清中Th1/Th2型细胞因子以及IL-15、IL-4mRNA表达水平的影响进行了研究。本研究证实:在哮喘小鼠T细胞的体外转染中,p SRZsi-IL-15与Lipofectamine2000达到最佳基因沉默效果比例为1:2,此种比例的pSRZsi-IL-15-Lip特异性地抑制哮喘小鼠T细胞IL-15mRNA的表达,达到了特异性基因沉默效应。基于此种比例我们成功地进行了pSRZsi-IL-15-Lip在哮喘小鼠模型呼吸道转染;pSRZsi-IL-15可有效地抑制肺组织IL-15mRNA的表达,减轻肺部Eos为主的炎性;可以部分抑制IL-4 mRNA的表达以及血清IgE水平,一定程度上减轻肺部炎症;哮喘模型肺部中性粒细胞的迁移和浸润部分依赖IL-15的调节,而Eos的迁移、浸润与IL-15关系密切,二者成正相关; pSRZsi-IL-15- Lip减轻气道炎症;对气道炎症的影响可能是通过促进嗜酸性粒细胞凋亡而发挥作用的。在pSRZsi-IL-15进行呼吸道体内转染过程中,其发挥效果高峰时间可能为转染后48-72小时;证实呼吸道转染pSRZsi-IL-15可能成为控制哮喘肺部炎症的新途径。