核桃遗传多样性分析及核心种质的构建

论文摘要

核桃是原产于我国的重要干果树种,其种质资源十分丰富,存在许多特异种质资源,但是对我国核桃属植物遗传多样性的研究尚少。本试验利用AFLP分子标记技术对普通核桃131份材料的遗传多样性进行了分析,构建了核桃的核心种质,并对核桃种间的亲缘关系进行了研究。主要结果如下: 1.确定了适于AFLP分析的核桃基因组DNA提取方法为改良CTAB法,其提取液成份为:100mmol/L Tris-HCl,pH 8.0;20mmol/L EDTA:1.4mol/LNaCl;2%CTAB:2%PVP40:100mmol/L B-巯基乙醇和10mmol/L Na2S2O5。粗提后的DNA经RNase液、苯酚-氯仿各抽提一次,氯仿-异戊醇抽提两次,得到了浓度大,基本无降解,蛋白质和RNA去除彻底,纯度高、质量好的核桃基因组DNA。 2.从126对引物组合中筛选出20对多态性高、条带清晰、分布均匀的引物组合用于普通核桃品种AFLP分析,共扩增出1643条电泳谱带,平均每对引物产生约82条谱带,其中1512条为多态性带,多态性比率为92.03%;其余131条谱带为所有材料共有,占7.97%。 3.从20对谱带清晰、多态性高的引物组合随机选出8对引物对核桃种间31个材料进行AFLP分析,共扩出833条电泳谱带,平均每对引物产生约102条AFLP带,其中14个条带为所有材料共有,占1.68%;其余819条均为多态性带,多态性检出率为98.32%。在核桃不同种之间AFLP标记的多态性检出率存在较大差异 4.UPGMA法对20对引物扩增的1643条谱带进行聚类分析,建立了131份供试材料的AFLP树状图,结合各样品间的遗传相似系数对其遗传多样性进行了分析,揭示了供试材料间遗传背景的相似性及复杂性,为核桃的品种鉴定和产权保护,提供了理论依据。 5.采用逐步聚类分组法,以多态性带为主要指标,结合形态分类学指标及地理来源,构建了供试品种的核心种质。 6.通过对核桃种间材料的遗传多样性进行分析,可将核桃属8个种分为4个组,黑核桃组,野核桃、吉宝核桃和心形核桃组,铁核桃、核桃楸和河北核桃组,普通核桃组。

论文目录

• 1 引言
• 1.1 遗传多样性研究的理论及方法
• 1.1.1 遗传多样性的概念及研究意义
• 1.1.2 遗传多样性的研究方法
• 1.1.3 遗传多样性研究的取样方法
• 1.2 核心种质构建研究进展
• 1.2.1 核心种质研究意义和概况
• 1.2.2 核心种质研究的步骤及内容
• 1.2.3 核心种质的取样方法
• 1.2.4 核心种质的检验与评价
• 1.3 AFLP分子标记技术及其应用
• 1.3.1 AFLP技术原理
• 1.3.2 AFLP技术特点
• 1.3.3 AFLP技术在果树遗传育种上的应用
• 1.4 核桃种质资源研究现状和本试验研究的意义
• 2 材料和方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 普通核桃AFLP分析试验材料
• 2.1.2 种间AFLP分析试验材料
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 核桃基因组DNA提取方法的研究
• 2.2.2 DNA提取过程
• 2.2.3 核桃基因组DNA的鉴定方法
• 2.2.4 核桃AFLP银染技术体系
• 2.2.5 引物筛选
• 2.2.6 电泳结果统计
• 2.2.7 核桃AFLP分析
• 2.2.8 供试核桃品种核心种质的构建
• 2.2.9 核心种质的遗传多样性评价
• 2.2.10 核桃属种间AFLP分析
• 2.3 主要试剂的配制方法
• 3 结果与分析
• 3.1 核桃基因组DNA的提取
• 3.1.1 适于核桃基因组DNA提取方法的研究
• 3.1.2 供试材料基因组DNA的提取
• 3.2 核桃样品的AFLP分析
• 3.2.1 引物的筛选
• 3.2.2 指纹图谱
• 3.2.3 供试材料的遗传多样性分析
• 3.3 供试品种核心种质的构建及遗传多样性评价
• 3.4 核桃种间AFLP分析
• 3.4.1 指纹图谱
• 3.4.2 相似系数
• 4 讨论
• 4.1 核桃基因组DNA的提取
• 4.2 核桃AFLP分析中应注意的问题
• 4.3 核桃的指纹图谱
• 4.4 核桃的遗传多样性
• 4.5 关于核桃的核心种质
• 4.6 核桃种间AFLP分析
• 5 结论
• 参考文献
• 附录
• 在读期间发表的论文
• 作者简历
• 10致谢
• 园艺学报