论文摘要
目的:观察实验性精索静脉曲张大鼠附睾HIF-1α（低氧诱导因子α亚基）和P53的表达与附睾唾液酸、肉毒碱的含量变化,研究精索静脉曲张后大鼠附睾组织的病理生理改变,探讨低氧在精索静脉曲张大鼠附睾功能变化中的作用及导致不育的可能机制。研究方法30只雄性健康Wister大鼠,完全随机分为实验组:10只,部分接扎大鼠左肾静脉,建立精索静脉曲张模型,模型建立49天后处死),假手术组（10只,所有手术操作同实验组,而不接扎左肾静脉,手术操作49天后处死）和对照组（10只,不行任何操作,饲养49天后处死）,根据模型建立成功与否以及是否符合纳入标准,手术组、假手术组和对照组分别有7、9、7只被纳入研究之内。取纳入研究的动物左侧附睾组织,沿纵轴切为两半。一半用DTNB的方法检测附睾组织中肉毒碱的含量;5-甲基苯二酚法检测附睾组织中唾液酸的含量;western blot的方法检测附睾组织中HIF-1α蛋白的表达并对其进行定量分析;另一半4%多聚甲醛固定24小时后,以免疫组化的方法检测附睾组织中HIF-1α蛋白的表达;免疫组化的方法检测附睾组织中P53的表达。结果Western blot检测的实验组大鼠附睾组织HIF-1α的表达明显高于对照组和假手术组（P＜0.05）;而对照组和假手术组无明显区别（P＞0.05）。免疫组化检测的实验组大鼠附睾和睾丸组织HIF-1α的表达明显高于对照组（P＜0.001）和假手术组（P＜0.001）;假手术组与对照组无明显差别（P＞0.05）。实验组附睾中唾液酸、肉毒碱含量均显著低于对照组和假手术组（P＜0.05）,而对照组与假手术组无明显差别（P＞0.05）;实验组附睾组织HIF-1α的相对灰度值与唾液酸、肉毒碱含量呈显著负相关（P＜0.05）;实验组大鼠左侧附睾上皮p53的表达阳性率显著高于对照组和假手术组（P＜0.05）,对照组和实验组无明显区别（P＞0.05）。结论1.实验性精索静脉曲张可显著减少附睾组织中对精子成熟具有重要作用的唾液酸、肉毒碱的分泌,进而使精子成熟功能障碍,影响受精的完成并最终导致不育。2.附睾组织中低氧标记物HIF-1α的表达明显上调表明,与精索静脉曲张对睾丸的影响相似,精索静脉曲张在使附睾功能降低的同时还可导致附睾组织的低氧。3.附睾组织的HIF-1α表达量与附睾组织唾液酸、肉毒碱的含量呈显著负相关性,即HIF-1α表达量所代表的低氧可导致附睾功能障碍。然而HIF-1α可通过诱导表达一系列的下游产物来改善组织对低氧的耐受能力,是组织对低氧的一种重要耐受机制。但从最后附睾功能受损这一结果不难看出,在精索静脉曲张的病理生理过程中,是以HIF-1α表达上调所介导的某种损害作用为主,而HIF-1α介导的代偿作用则处于失代偿状态。由以往的知识可知,这种损害作用可能就是HIF-1α诱导的附睾上皮细胞的凋亡。这有待于进一步的研究证实。4.实验组大鼠左侧附睾上皮p53的表达显著升高,结合上面的结论不难看出,其在HIF-1α介导的附睾上皮的损害作用中发挥重要作用。既HIF-1α诱导的附睾上皮细胞的凋亡可能是通过p53依赖的途径来实现的。至于P53表达上调在精索静脉曲张导致不育的病理生理机制中还有什么其他作用,还有待于进一步的研究。意义本研究从附睾组织的低氧方面揭示了精索静脉曲张导致不育的机制,开创性的从附睾方面揭示了精索静脉曲张导致不育的病理生理机制,并为临床制定针对性的治疗措施提供了依据。