论文题目: SARS-CoV主要结构蛋白基因共表达质粒的构建及其免疫原性研究
论文类型: 硕士论文
论文专业: 病原生物学
作者: 摆茹
导师: 周娅,王希良
关键词: 共表达,质粒,免疫应答
文献来源: 宁夏医学院
发表年度: 2005
论文摘要: 目的选择编码SARS冠状病毒(SARS coronavirus, SARS-CoV)刺突蛋白(Spike protein, S)和核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein, N)的基因,并以鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(mGM-CSF)为基因佐剂,构建S1蛋白和N蛋白、S1蛋白和mGM-CSF、N蛋白和mGM-CSF共表达的三种质粒,并观测它们接种小鼠后的免疫效果,为SARS DNA疫苗的研制奠定基础。方法从灭活的SARS-CoV中提取总RNA,RT-PCR扩增编码S1蛋白和N蛋白的基因片段,PCR扩增编码mGM-CSF的基因片段,经测序正确后分别克隆或亚克隆到真核表达载体pVAX1上,构建质粒并命名为pVAX1/S1-N, pVAX1/S1-mGM-CSF和pVAX1/N-mGM-CSF。三种共表达质粒分别转染COS-7细胞,用免疫细胞化学和Western Blot方法鉴定表达的融合蛋白。采用pVAX1/S1-N与mGM-CSF质粒共免疫,另两种共表达质粒单独免疫小鼠的接种策略, ELISA法检测SARS特异性IgG抗体及IgG亚类的含量,流式细胞仪检测T细胞亚群,ELISPOT检测脾细胞中特异性IFN-γ和IL-2分泌细胞的频数。结果构建出pVAX1/S1-N, pVAX1/S1-mGM-CSF和pVAX1/N-mGM-CSF三种共表达质粒,经DNA序列分析和双酶切鉴定证实质粒构建正确,并均能在COS-7细胞内表达。三种共表达质粒均能诱导小鼠机体产生SARS-CoV特异性IgG,且其滴度随免疫次数的加强而逐步增高,IgG亚类测定显示IgG2a/IgG1的比值均>1;三组免疫小鼠的CD4+和CD8+T细胞数量均显著增加(P<0.01),而CD4+/CD8+T细胞的比值均明显降低(P<0.01),脾细胞中特异性IFN-γ和IL-2分泌细胞的频数均明显增高(P<0.01)。三种共表达质粒中,pVAX1/S1-N与mGM-CSF质粒共免疫组的免疫效果又明显优于另两种共
论文目录:
摘要
ABSTRACT
前言
材料与方法
结果
讨论
结论
参考文献
综述
综述参考文献
致谢
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个人简历
发布时间: 2007-03-22
参考文献
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