论文摘要
膜荚黄芪为长白山区濒危的野生药用植物之一,是珍贵的中药材资源,其次生代谢产物具有多种生理功能,具有重要的药用价值。但是膜荚黄芪功能基因和次生代谢生物合成途径的研究相对较少。因此,保存膜荚黄芪基因资源和加速基因水平的研究进程具有重要意义。本文构建了野生膜荚黄芪根的cDNA文库,通过cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)方法克隆了异黄酮合成酶(IFS)基因的全长序列,分析了IFS基因在膜荚黄芪叶片和不定根中的表达情况,并第一次尝试将IFS基因转入生菜。应用SMART技术成功构建了膜荚黄芪根cDNA文库。经文库质量鉴定表明:原始文库滴度为4.6×105 cfu/mL,重组率接近100%,插入片段大小范围在0.5-2kb之间。利用RACE技术从膜荚黄芪中克隆了异黄酮合成中起关键作用的IFS基因全长cDNA序列,命名为AmIFS(登录号:JN882009)。AmIFS cDNA全长1903 bp,包括1578 bp的ORF,116 bp的5’非转译区(5’UTR),209 bp的3’非转译区(3’UTR)和13 bp的polyA尾,推测其编码525个氨基酸。通过半定量实验表明,在膜荚黄芪生长发育过程的5个时期中,IFS基因在花期(6月)表达量最低,在10月份表达量最高;IFS基因在不定根生长过程中持续表达,预示不定根能够生物合成黄芪异黄酮。转IFS基因生菜实验,初步确定了外源的膜荚黄芪IFS基因已经整合进生菜基因组。
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