论文摘要
目的:应用激光扫描共聚焦显微镜(laser confocal scanning microscopeLCSM)对不同年龄兔关节软骨细胞细胞骨架形态学的研究及荧光定量的检测,以从细胞水平阐明关节软骨的退变过程,了解生物力学因素在骨性关节炎发病机理中的作用。为软骨组织工程中相关力学因素的研究提供新思路和新方法,为软骨组织工程种子细胞时机的选择提供理论依据。方法:15只雌性新西兰白兔,按照年龄分为3组:幼年组5只(约6周龄)、成年组5只(约7月龄)、老年组5只(约31月龄)。各组实验动物均用空气栓塞处死,无菌条件下,从不同年龄新西兰白兔的四肢关节髁突面削取软骨片,采用机械一酶消化法分离软骨细胞,经台盼蓝拒染计数,将细胞按1×10~5个/孔接种于24孔培养板。利用激光共聚焦扫描显微镜对软骨细胞细胞骨架进行形态学观察及荧光含量定量检测。结果:不同年龄的关节软骨细胞的细胞骨架有形态学改变。在对不同年龄组软骨细胞细胞骨架进行荧光定量检测,发现微管蛋白含量在不同年龄组中有差异,幼年组微管蛋白含量＞成年组(P＜0.05),幼年组微管蛋白含量＞老年组(P＜0.05),成年组与老年组之间无统计学意义。在对微丝蛋白荧光含量检测,发现幼年组微丝蛋白含量＞成年组＞老年组(P＜0.05),两两之间有统计学意义。对纽蛋白荧光含量检测,发现幼年组纽蛋白含量＞成年组＞老年组(P＜0.05),两两之间有统计学意义。对波形蛋白荧光含量检测,发现幼年组波形蛋白含量与成年组、老年组之间均无统计学意义。关节软骨细胞的细胞骨架中,微丝蛋白含量与纽蛋白含量有正相关性(r=0.659)。结论:不同年龄的关节软骨细胞细胞骨架表现出差异;微管蛋白、微丝蛋白、纽蛋白形态学及荧光含量有差异,波形蛋白形态学及荧光含量无明显差异.微丝蛋白含量与纽蛋白含量有正相关性.