蔬菜中有机磷农药残留快速检测方法的研究

论文摘要

本文针对有机磷农药残留快速检测技术存在的问题,主要进行了以下三个方面的研究:1、比较了三种来源（家蝇、鲤鱼脑、鸡肝）的乙酰胆碱酯酶（AChE）对三种有机磷农药（敌敌畏、敌百虫、氧乐果）的敏感性。发现,对于敌敌畏,家蝇＞鲤鱼脑＞鸡肝;对于敌百虫,家蝇敏感性最高,鲤鱼脑和鸡肝酶对其不敏感;对于氧乐果,在0～300μg·L-1浓度时,对三种酶的抑制率相差不大,当浓度大于300μg·L-1时,家蝇酶的抑制效果明显好于其余两种。综合考虑三种酶对三种农药的敏感性,确定家蝇的AChE是较为理想的指示有机磷类农药的敏感酶。2、研究了家蝇AChE在三种微孔滤膜（尼龙、醋酸纤维素和硝酸纤维素,孔径均为0.45μm）上的固定化效果,确定硝酸纤维素膜的固定效果较好。对硝酸纤维素膜固定家蝇AChE的最佳条件进行了研究,确定为:AChE用量为10U,5%（体积分数）的戊二醛5μL,30μL 1%（质量分数）的牛血清蛋白（BAS）,配成200μL的酶溶液,4℃固定8h。并对最优条件下的固定化效果进行了评价。3、对商品化的AChE试剂包进行了优化研究。在保证较高灵敏度的前提下,确定了一种更经济的试剂配方,即酶和底物的用量调整为推荐用量的3/4,显色剂用量调整为推荐用量的1/2,总体上节约了1/3的成本。通过F检验证明,调整后配方和原配方之间无显著性差异。调整后的配方对三种常见有机磷农药氧乐果、敌百虫和敌敌畏的检出下限大约分别为0.37mg·L-1、0.09mg·L-1和0.035mg·L-1,检测限基本不变。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 目录
• 第一章 绪论
• 1.1 果蔬中有机磷农药残留的现状及危害
• 1.2 国内外关于蔬菜中有机磷农药残留限量的要求
• 1.3 有机磷农药
• 1.3.1 有机磷农药的性质
• 1.3.2 有机磷农药的种类
• 1.3.3 有机磷农药的毒理
• 1.4 农药残留分析方法综述
• 1.4.1 仪器分析方法
• 1.4.2 农药残留快速筛选检测技术
• 1.5 本课题研究的内容
• 第二章 酶源选择
• 2.1 前言
• 2.2 材料与仪器
• 2.2.1 材料与试剂
• 2.2.2 主要试验药品
• 2.3 试验部分
• 2.3.1 粗酶液的制备
• 2.3.2 测定指标与方法
• 2.4 结果与分析
• 2.4.1 三种酶的酶活稳定性
• 2.4.2 三种酶反应显色时间的对比
• 2.4.3 酶活力保存性能
• 2.4.4 不同浓度的农药对三种酶活力的抑制
• 2.4.5 影响选择性抑制的因素
• 第三章 酶固定化方法的研究
• 3.1 前言
• 3.2 试验材料和方法
• 3.2.1 材料与仪器
• 3.2.2 酶促反应的电化学检测
• 3.2.3 游离酶活力与电流的关系
• 3.2.4 固定化酶活力的测定
• 3.3 试验部分
• 3.3.1 酶固定方法
• 3.3.2 最佳固定化条件的研究
• 3.4 结果与分析
• 3.4.1 载体选择
• 3.4.2 最佳固定条件
• 3.4.3 固定化酶片的活力重现性
• 3.4.4 固定化酶片催化底物的重现性
• 3.4.5 固定化酶片的贮存稳定性
• 3.5 小结
• 第四章 乙酰胆碱酯酶试剂包的优化研究
• 4.1 检测原理
• 4.2 主要仪器和试剂
• 4.3 商品化试剂包原配方以及操作方法
• 4.3.1 试剂包原配方
• 4.3.2 操作方法
• 4.4 试验部分
• 4.4.1 吸收曲线
• 4.4.2 配方优化
• 4.4.3 正交试验
• 4.4.4 配方优化前后的对比试验
• 4.4.5 优化后配方的检出限
• 4.4.6 抑制时间对检出限的影响
• 4.5 本章小结
• 第五章 总结与展望
• 5.1 乙酰胆碱酯酶的酶源选择
• 5.2 乙酰胆碱酯酶固定方法研究
• 5.3 乙酰胆碱酯酶试剂包的优化
• 5.4 总结
• 5.5 展望
• 攻读硕士学位期间发表的论文及参与的课题
• 致谢
• 参考文献
• 附录