纳米氧化铈对蛋鸡消化酶活性及基因表达的影响

论文摘要

本试验旨在研究纳米氧化铈对蛋鸡消化酶活性及基因表达的影响,从分子水平阐述纳米氧化铈影响消化酶活性的作用机理。本试验选择26周龄健康商品蛋鸡384只,随机分为4组,每组8个重复,每个重复12只鸡。以玉米-豆粕型日粮为基础日粮,在基础日粮中分别添加0（Ⅰ）,30（Ⅱ）,60（Ⅲ）,90mg/kg（Ⅳ）纳米氧化铈,预试期1周,试验期6周。试验结果表明:1.纳米氧化铈对肠道消化酶活性的影响:不同水平的纳米氧化铈对肠道胰淀粉酶和胰蛋白酶活性有影响,对胰脂肪酶活性无显著影响（P>0.05）。与对照组相比,Ⅱ组（30mg/kg）有提高胰淀粉酶和胰蛋白酶活性的趋势,但差异不显著（P>0.05）。Ⅲ组（60mg/kg）显著降低了胰淀粉酶活性和胰蛋白酶活性（P<0.05）,Ⅳ组（90mg/kg）极显著降低了胰淀粉酶活性（P<0.01）,显著降低了胰蛋白酶活性（P<0.05）。2.纳米氧化铈对胰腺消化酶的影响:日粮中添加纳米氧化铈对胰腺淀粉酶、胰脂肪酶及胰蛋白酶有影响。与对照组相比,Ⅱ组（30mg/kg）有提高胰淀粉酶、胰脂肪酶,胰蛋白酶活性的趋势,Ⅲ组（60mg/kg）有降低胰淀粉酶和胰蛋白酶活性的趋势,但差异均不显著（P>0.05）。Ⅲ组（60mg/kg）显著提高了胰脂肪酶活性（P<0.05）,显著降低了胰淀粉酶活性（P<0.05）。3.纳米氧化铈对胰腺消化酶基因表达的影响:不同水平的纳米氧化铈对消化酶基因mRNA水平有影响。与对照组相比,Ⅱ组（30mg/kg）极显著上调了胰蛋白酶Ⅱ基因mRNA水平（P<0.01）,显著上调了胰淀粉酶、胰蛋白酶Ⅰ基因mRNA水平（P<0.05）,对胰脂肪酶基因mRNA水平无显著影响（P>0.05）。Ⅲ组（60mg/kg）显著上调了胰脂肪酶基因mRNA水平（P<0.05）,但却极显著下调了胰蛋白酶Ⅱ基因mRNA水平（P<0.01）,显著下调了胰淀粉酶基因mRNA水平（P<0.05）。Ⅳ组（90mg/kg）极显著下调了胰蛋白酶Ⅱ基因mRNA表达水平（P<0.01）,显著下调了胰淀粉酶基因mRNA表达水平（P<0.05）,对胰脂肪酶基因mRNA表达水平无显著影响（P>0.05）。此外,胰蛋白酶Ⅰ和胰蛋白酶Ⅱ是胰蛋白酶基因家族的两种同工酶,试验各组胰蛋白酶Ⅱ基因mRNA水平分别是胰蛋白酶ⅠmRNA表达量的6.0、6.0、4.5和5.2倍,因此胰蛋白酶活性主要取决于胰蛋白酶Ⅱ基因mRNA水平。试验研究结果表明,纳米氧化铈在一定程度上影响胰蛋白酶基因的表达,这种作用可能发生在转录或者转录后水平,进而影响胰蛋白酶的合成和分泌。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 稀土化合物的研究进展
• 1.1.1 稀土饲料添加剂在动物体内的作用机理
• 1.1.2 稀土元素在畜牧业中应用
• 1.1.3 稀土的代谢调控及作为饲料添加剂的安全性
• 1.2 稀土饲料添加剂的研究趋势
• 1.3 家禽消化生理特点及主要消化酶的基因表达调控
• 1.3.1 家禽消化生理特点
• 1.3.2 禽类主要消化酶的研究
• 1.3.3 消化酶基因表达的表达与调控机制
• 1.4 实时荧光定量PCR
• 1.4.1 实时荧光定量PCR 原理
• 1.4.2 实时荧光定量PCR 技术中的几个关键概念
• 1.4.3 实时荧光定量PCR 主要的检测方法
• 1.4.4 实时荧光定量PCR 的定量方法
• 1.5 研究内容
• 1.6 特色和创新之处
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 试验动物与试验材料
• 2.1.2 试验设计与日粮组成
• 2.1.3 试验动物的饲养与管理
• 2.1.4 样品的采集与制备
• 2.1.5 主要试剂
• 2.1.6 主要仪器
• 2.1.7 溶液的配制
• 2.2 试验指标及测定方法
• 2.2.1 消化酶指标
• 2.2.2 胰腺组织RNA 的提取及检测
• 2.2.3 cDNA 的合成
• 2.2.4 PCR 反应
• 2.2.5 PCR 产物的纯化与回收
• 2.2.6 目的基因的克隆
• 2.2.7 质粒的提取
• 2.2.8 荧光定量分析
• 2.3 计算及统计方法
• 3 结果与分析
• 3.1 纳米氧化铈对主要消化酶活性的影响
• 3.1.1 纳米氧化铈前肠主要消化酶活性的影响
• 3.1.2 纳米氧化铈对胰腺主要消化酶活性的影响
• 3.2 消化酶基因实时荧光定量PCR 条件的建立
• 3.2.1 RNA 的提取和检测结果
• 3.2.2 胰淀粉酶、胰脂肪酶、胰蛋白酶Ⅰ、胰蛋白酶Ⅱ及β-actin 基因RT-PCR 扩增结果
• 3.2.3 胰淀粉酶、胰脂肪酶、胰蛋白酶Ⅰ、胰蛋白酶Ⅱ及β-actin 基因克隆质粒测序结果
• 3.2.4 胰淀粉酶、胰脂肪酶、胰蛋白酶Ⅰ、胰蛋白酶Ⅱ及β-actin 目的基因序列标准曲 线的建立
• 3.2.5 荧光定量PCR 产物的特异性
• 3.3 纳米氧化铈对胰腺主要消化酶基因表达水平的影响
• 3.3.1 纳米氧化铈对胰淀粉酶基因表达水平的影响
• 3.3.2 纳米氧化铈对胰脂肪酶基因表达水平的影响
• 3.3.3 纳米氧化铈对胰蛋白酶Ⅰ基因表达水平的影响
• 3.3.4 纳米氧化铈对胰蛋白酶Ⅱ基因表达水平的影响
• 3.3.5 纳米氧化铈对胰淀粉酶、胰脂肪酶、胰蛋白酶Ⅰ及胰蛋白酶Ⅱ基因mRNA 表达动态的影响
• 4 讨论
• 4.1 纳米氧化铈对主要消化酶活性的影响
• 4.2 消化酶基因REAL-TIME RT-PCR 条件的建立
• 4.2.1 RNA 的质量
• 4.2.2 内参基因的选择
• 4.2.3 相对定量方法及标准品的选择
• 4.3 纳米氧化铈对胰腺主要消化酶基因表达水平的影响
• 4.3.1 纳米氧化铈对胰淀粉酶基因表达水平的影响
• 4.3.2 纳米氧化铈对胰脂肪酶基因表达水平的影响
• 4.3.3 纳米氧化铈对胰蛋白酶基因表达水平的影响
• 5 结论
• 参考文献
• 在读期间发表的论文
• 作者简介
• 致谢