湘研十六号种子纯度的RAPD分析

论文摘要

随着分子生物学的迅猛发展,RAPD（随机扩增多态性DNA）标记技术已广泛应用于生物学诸多领域。本文应用RAPD技术对湘研十六号种子纯度进行了鉴定,并对RAPD技术的最适条件进行了探讨。 分析了模板DNA的制备和反应组分对RAPD的影响。最终确定最佳反应体系为:总体系为25ul,模板DNA量为25～50ng,MgCl2浓度为2.0mmol/L,引物浓度为15～45ng,dNTP浓度为0.2mmol/L,Taq DNA聚合酶根据其活性为1.0～1.5U。反应程序为:94℃预变性5min,94℃变性40s,37℃退火40s,72℃延伸90s,循环40次,再72℃后延伸7min。 鉴定和分析了品种真实性与亲本多态性。本文在筛选引物前进行了父母本以及F1代杂交种子品种真实性鉴定与亲本多态性分析,实验结果是:在利用S61,S1002引物鉴定父母本时,结果发现父母本的均一性好,在父本、母本各5粒种子内部之间的RAPD指纹图谱一样,均未发现假种子。 筛选出应用于黄瓜种子纯度鉴定的引物和建立了亲本及其杂交种子的RAPD指纹图谱。从100引物中筛选出了应用于黄瓜种子纯度鉴定的引物6条:偏母型引物（S10,S320）、偏父型引物（S61,S74）、互补型引物（S1002,S301）。利用S1002鉴定湘研十六号的纯度发现:发现父母本无其它种子混杂而在F1代杂交种子中发现2号,7号,36号,62号,65号为假杂种。 RAPD技术能够用来鉴定辣椒种子纯度,而且在建立其反应体系与反应程序后具有相当高的可靠性与准确性。

论文目录

• 第一章 前言
• 1 种子纯度鉴定研究进展
• 1.1 常规鉴定法
• 1.1.1 种子形态鉴定
• 1.1.2 幼苗形态鉴定
• 1.1.3 田间小区种植鉴定
• 1.1.4 物理化学鉴定
• 1.1.5 电泳鉴定法
• 1.2 DNA分子标记鉴定法
• 1.2.1 RFLP
• 1.2.2 AFLP
• 1.2.3 SSR简单序列重复
• 1.2.4 RAPD（Random Amplified Polymorphic DNA）
• 1.2.5 SCAR（Sequenced Characterized Amplified Regions）
• 1.2.6 ERPAD技术
• 1.2.7 RPPA技术
• 2 本文研究的目的及意义
• 第二章 实验内容
• 1 材料方法
• 1.1 材料、试剂及设备
• 1.1.1 材料
• 1.1.2 试剂
• 1.1.3 设备
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 辣椒基因组DNA的提取方法
• 1.2.2 DNA质量检测
• 1.2.3 RAPD扩增及扩增产物的检测
• 1.2.3.1 RAPD扩增的反应体系的建立
• 1.2.3.2 RAPD扩增循环参数的建立
• 1.2.3.3 RAPD扩增产物的检测
• 2 结果
• 2.1 DNA提取方法对RAPD分析的影响
• 2.2 RAPD反应的影响
• 2.2.1 反应组分对RAPD的影响
• 2.2.1.1 模板对RAPD结果的影响
• 2.2.1.2 Tag酶对RAPD结果的影响
• 2.2.1.3 dNTP对RAPD结果的影响
• +2浓度对RAPD结果的影响'>2.2.1.4 Mg⁺²浓度对RAPD结果的影响
• 2.2.1.5 引物对RAPD结果的影响
• 2.2.2 反应参数对RAPD的影响
• 2.2.2.1 复性温度对RAPD的影响
• 2.2.2.2 延伸时间对RAPD的影响
• 2.2.2.3 扩增循环数对RAPD的影响
• 2.3 品种真实性鉴定与亲本多态性分析
• 2.4 引物筛选与DNA指纹图谱类型的建立
• 2.4.1 引物筛选
• 2.4.2 DNA指纹图谱类型的建立
• 2.5 辣椒杂交种子纯度的RAPD鉴定
• 2.6 田间鉴定种子纯度
• 3 讨论
• 3.1 影响RAPD分析的因素
• 3.1.1 DNA提取方法对RAPD的影响
• 3.1.2 RAPD扩增的反应体系及反应程序的影响
• 3.2 引物筛选
• 3.3 RAPD应用于种子纯度鉴定的遗传机理
• 4 结论
• 参考文献
• 致谢