食管癌淋巴管生成与淋巴结转移关系的初步研究

论文摘要

背景与目的食管癌的淋巴结转移对病人的预后判断有重要的意义,但肿瘤通过淋巴管生成促进淋巴结转移仍然存在很多疑问。使用免疫组化及原位杂交的方法研究91例食管癌组织石蜡标本及20例新鲜标本中VEGF-C, VEGF-D及其受体VEGFR-3、D2-40的表达,拟探讨食管癌中淋巴管生成及淋巴结转移。材料与方法1研究对象:（1）石蜡库存标本:收集汕头大学医学院病理学教研室2001.11～2006.11间收检的附属肿瘤医院食管癌切除标本存档蜡块91例及相关临床病理资料,食管癌切缘基本正常黏膜14例。（2）新鲜标本:收集食管癌外科手术中切除新鲜标本20例,术中取材后迅速固定。2 HE染色:用以确定组织形态及进行病理学诊断。3免疫组织化学染色与分析: EnVision Labelled Peroxidase System（ELPS）二步法检测石蜡组织切片中VEGF-C,VEGFR-3,VEGF-D,D2-40蛋白的表达情况。利用Leica Qwin standard Y2.8图像分析系统对切片进行阳性细胞计数。4原位杂交:检测组织切片中VEGF-D的mRNA表达,观察其与免疫组织化学染色结果是否具有一致性。结果1组织病理学淋巴结转移在患者的不同年龄、性别和浸润深度间无差别（P﹥0.05）。小细胞癌的淋巴结转移率（77.8%）高于鳞状细胞癌组（59.37%）,差别有显著性（P<0.05）。2免疫组织化学染色结果发现VEGF-C、VEGF-D及受体VEGFR-3在不同类型的食管癌间表达无差别（P﹥0.05）;四种蛋白在淋巴结转移组的表达均高于无转移组（P<0.05）;VEGFR-3﹑D2-40在食管鳞状细胞癌的脉管数量高于正常黏膜（P<0.01）。VEGFR-3标记的脉管数在VEGF-C、VEGF-D阳性及阴性组之间差别有意义（P<0.05）;D2-40在VEGF-D阳性及阴性组之间标记的淋巴管数量差别无统计学意义（P﹥0.05）,而在VEGF-C阳性及阴性组之间差别有统计学意义（P<0.05）。VEGFR-3及D2-40在标记同一样本的淋巴管数量有显著性差异（P<0.01）。3原位杂交结果20例食管鳞状细胞癌术中切除新鲜标本,选择IHC和ISH两种方法检测VEGF-D蛋白及mRNA表达,经一致性检验结果具有一致性（Kappa=0.737 , P<0.001）。4 VEGF-D阳性细胞计数淋巴结转移组与非转移组组间阳性细胞指数有差别（P<0.01）。结论1 VEGF-C可能通过受体VEGFR-3诱导食管癌周围淋巴管生成而促进肿瘤淋巴结转移,与LVD联合可作为评估食管癌淋巴结转移的指标。2 VEGF-D由癌细胞分泌,可能与淋巴管生成无关;通过受体VEGFR-3参与促进肿瘤的淋巴结转移。3食管癌组织中LVD高于正常组织,伴淋巴结转移食管癌组LVD较无转移组高,提示食管癌组织中可能存在淋巴管新生。4 VEGFR-3不仅表达在淋巴管并且在血管表达,与D2-40标记淋巴管数量有差别, D2-40是更可靠的淋巴管标记物。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略语
• 前言
• 材料与方法
• 1 材料
• 1.1 标本来源及分组
• 1.2 主要仪器设备
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要溶液配制
• 1.5 原位杂交取材
• 2 方法
• 2.1 HE 染色步骤
• 2.2 免疫组织化学
• 2.3 原位杂交
• 2.4 免疫组织化学和原位杂交结果判定方法
• 2.5 统计学分析
• 结果
• 1.组织病理学
• 2 免疫组织化学染色
• 3.原位杂交结果
• 4 VEGF-D 阳性细胞计数
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 综述
• 致谢
• 研究生期间发表文章题录
• 本人简历