盐酸多奈哌齐对VaD大鼠模型脑保护作用的实验研究

盐酸多奈哌齐对VaD大鼠模型脑保护作用的实验研究

论文摘要

研究目的:复制大鼠全脑缺血再灌注引起的血管性痴呆模型,应用DP干预治疗后,观察DP对缺血再灌注大鼠空间学习和记忆功能的作用,检测炎症相关指标在大鼠皮层和海马的表达情况,探讨应用DP对皮层和海马神经元的保护作用可能的机制。方法:本实验选用雄性SD大鼠60只,体重250~280g,随机分为3组:假手术组,模型对照组,DP治疗组,每组20只。按照王蕊的方法,采用腹腔注射硝普钠及反复夹闭双侧颈总动脉的方法,造成血管性痴呆动物模型。DP治疗组用DP灌胃给药,每天一次。大鼠学习和记忆功能在造模后第10天、11天、12天、13天采用Y型迷宫测试。术后第14天,处死大鼠,经心脏前固定,断头取脑置于4%多聚甲醛的0.1M磷酸缓冲液中4℃下行后固定24小时,常规脱水、石蜡包埋,行冠状面连续切片,厚度约5μm,经二甲苯脱蜡及酒精梯度至水。切片标本分别进行下列染色:①HE染色;②GFAP,ICAM-1,Bcl-2和Bax免疫组织化学染色,同时用BioSens digital imaging图象分析系统进行定量分析。实验数据用(?)±s表示。结果:在迷宫测试中模型对照组的学习和记忆成绩明显低于假手术组和DP治疗组,表现为全天错误次数增多、反应时间延长(P<0.05),而后两组间的成绩则无明显差异。HE染色可见假手术组皮层染色均匀,神经细胞数目多,排列紧密、大小均匀、结构整齐。胞核呈圆形或椭圆形,核仁明显。模型对照组脑组织疏松,神经细胞肿胀明显,细胞呈大空泡变,细胞核变形,核固缩,可见大量深染的神经细胞,胶质细胞增生明显。DP治疗组明显优于模型对照组,可见皮层染色均匀,神经细胞肿胀,数目较多,排列较密、结构较整齐。胞核呈圆形或椭圆形,核略深染,核仁清晰,稍有变形。可见少量胶质细胞增生及少量固缩变性的神经元。GFAP、ICAM-1免疫组化表达情况:模型对照组皮层及海马可见大量免疫组化阳性细胞,DP治疗组阳性细胞数介于模型对照组和假手术组之间。应用图像分析软件分析显示,模型对照组GFAP、ICAM-1的表达明显增强,面积及积分光密度显著升高,DP治疗组GFAP、ICAM-1表达的面积及积分光密度均较模型对照组显著减少(P<0.01)。假手术组Bcl-2和Bax蛋白仅少量表达。模型对照组Bcl-2蛋白高表达,但较DP治疗组为少(P<0.01)。而Bax蛋白在DP治疗组较模型对照组表达减弱(P<0.01)。结论:①DP可通过降低VaD模型大鼠GFAP、ICAM-1的过度表达,减轻神经元的损伤,进而改善血管性痴呆大鼠学习记忆能力。②DP可上调抑凋亡基因Bcl-2表达水平,下调促凋亡基因Bax表达水平,抑制细胞凋亡,从而保护神经元的功能。

论文目录

  • 英文缩略词表
  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 1.前言
  • 1.1.血管性痴呆的研究现状
  • 1.2.胆碱酯酶抑制剂应用于VAD
  • 1.3.DP的神经保护作用体外研究进展
  • 1.4.大鼠VAD模型的建立
  • 2.实验材料
  • 2.1.实验动物
  • 2.2.实验试剂
  • 2.3.实验器械与仪器
  • 2.4.实验所需主要溶液及配制
  • 3.实验方法
  • 3.1.实验动物的筛选
  • 3.2.学习记忆能力测试(Y型电迷宫实验)
  • 3.3.实验动物的分组
  • 3.4.动物模型的建立
  • 3.5.药物干预
  • 3.6.组织切片的制备
  • 3.7.免疫组织化学反应
  • 4.数据处理
  • 5.结果
  • 5.1.手术对大鼠存活和运动能力的影响
  • 5.2.手术对大鼠学习记忆的影响
  • 5.3.HE染色结果
  • 5.4.免疫组化结果
  • 6.讨论
  • 6.1.星形胶质细胞与学习记忆
  • 6.2.GFAP的性质、功能及在反应性AST的表达情况
  • 6.3.VAD大鼠皮层ICAM-1的表达情况及DP的作用
  • 6.4.凋亡与学习记忆
  • 6.5.海马结构在学习记忆中的作用
  • 6.6.展望
  • 7.结论
  • 附图:
  • 参考文献:
  • 致谢
  • 相关论文文献

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