四角蛤蜊糖胺聚糖的提取、纯化及生理活性研究

论文摘要

糖胺聚糖是由含已糖醛酸和己糖胺成分的重复二糖单元连接成的直链杂多糖,具有抗凝血、抗肿瘤、降血脂等多种生物学活性。研究表明,贝类中含有丰富的糖胺聚糖。四角蛤蜊是一种重要的海洋食用经济贝类,同时具有较大的药用和保健作用,开展四角蛤蜊糖胺聚糖的提取,纯化和生理活性研究,可以为四角蛤蜊资源的高值化开发利用提供理论依据,为新型药物先导化合物的开发探索一条新途径。本研究的主要内容如下：在单因素试验的基础上,利用SAS软件和响应面分析相结合的方法对四角蛤蜊糖胺聚糖的提取工艺进行了优化。通过试验得到了二次多项式回归模型,该模型能较好的反映各因素与响应值之间的关系。最佳提取工艺的条件是水料比3：1,酶解时间3.5h,酶添加量1.0%。在此条件下,糖胺聚糖的提取率可达0.448%。对糖胺聚糖的粗提物进行纯化以除去蛋白质、色素和无机盐等杂质。一次纯化采用吸附法、透析法和等电点沉淀法得G1,回收率41.54%,其GAG含量由34.46%提高到82.92%;二次纯化采用季铵盐络合法得G2,回收率为87.22%,GAG含量由82.92%提高到95.03%。对纯化后的糖胺聚糖进行紫外光谱扫描和琼脂糖凝胶电泳。紫外扫描光谱显示,纯化后糖胺聚糖在280nm和260nm附近没有明显的吸收峰,说明纯化后样品中蛋白质和核酸含量很低,杂质基本被除去。琼脂糖凝胶电泳显示,与标品相比,四角蛤蜊GAG图谱斑点有明显的拖尾,表明制品中糖胺聚糖种类不均一或分子量分散性较大。对四角蛤蜊糖胺聚糖体外清除自由基和体外抗凝血作用进行了研究。结果表明,其对羟基自由基和超氧阴离子自由基均具有一定的清除作用,具有一定的抗凝血活性,但其作用强度与肝素比相对较弱。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 前言
• 1.1 糖胺聚糖的研究概况
• 1.1.1 糖胺聚糖的分类及结构
• 1.1.2 糖胺聚糖的提取方法
• 1.1.3 糖胺聚糖的分离纯化方法
• 1.1.4 糖胺聚糖的分析测定方法
• 1.1.5 糖胺聚糖生理活性研究
• 1.2 四角蛤蜊的研究概况
• 1.2.1 四角蛤蜊的生物学特征与生态习性
• 1.2.2 四角蛤蜊的药用研究
• 1.3 本课题研究的内容和目的意义
• 1.3.1 研究的主要内容
• 1.3.2 研究的目的和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 试验生物材料
• 2.1.2 药品及试剂
• 2.1.3 主要仪器及设备
• 2.1.4 溶液的配制
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 原材料预处理
• 2.2.2 四角蛤蜊糖胺聚糖粗提
• 2.2.3 糖胺聚糖含量的测定
• 2.2.4 双酶组合最佳酶比例的确定
• 2.2.5 糖胺聚糖提取工艺的单因素试验
• 2.2.6 响应曲面法优化糖胺聚糖提取工艺
• 2.2.7 糖胺聚糖的纯化
• 2.2.8 糖胺聚糖纯度检测
• 2.2.9 琼脂糖凝胶电泳
• 2.2.10 糖胺聚糖生理活性研究
• 3 结果与讨论
• 3.1 四角蛤蜊糖胺聚糖的一般理化性质
• 3.2 肝素钠标准曲线
• 3.3 双酶组合最佳酶比例的确定
• 3.4 四角蛤蜊糖胺聚糖提取工艺单因素试验
• 3.4.1 水料比对糖胺聚糖提取率的影响
• 3.4.2 酶解时间对糖胺聚糖提取率的影响
• 3.4.3 酶添加量对糖胺聚糖提取率的影响
• 3.5 响应曲面法优化四角蛤蜊糖胺聚糖提取工艺
• 3.6 四角蛤蜊糖胺聚糖的纯化
• 3.6.1 糖胺聚糖的一次纯化
• 3.6.2 糖胺聚糖的二次纯化
• 3.7 四角蛤蜊糖胺聚糖的紫外吸收光谱
• 3.8 四角蛤蜊糖胺聚糖的琼脂糖凝胶电泳
• 3.9 四角蛤蜊糖胺聚糖体外抗氧化作用
• 3.9.1 对羟基自由基（·OH）清除作用
• -2·)清除作用'>3.9.2 对超氧阴离子自由基(O^-2·)清除作用
• 3.10 四角蛤蜊糖胺聚糖体外抗凝血作用
• 3.10.1 抗凝血时间比较
• 3.10.2 复钙法检验四角蛤蜊糖胺聚糖的抗凝血效果
• 4 结论
• 4.1 四角蛤蜊糖胺聚糖的提取
• 4.2 四角蛤蜊糖胺聚糖的纯化
• 4.3 四角蛤蜊糖胺聚糖的生理活性研究
• 5 展望
• 6 参考文献
• 7 论文发表情况
• 8 致谢