猴头菇多糖对呼肠孤病毒感染番鸭细胞凋亡及免疫功能的影响

论文摘要

呼肠孤病毒病是一种以肝、脾出现多处灰白色坏死点为主要病变特征的急性传染病,俗称番鸭肝“白点病”、“花肝病”。前人研究已表明,该病毒感染后会造成感染番鸭免疫抑制,还会诱导其相关组织细胞凋亡。本研究主要探讨猴头菇多糖对呼肠孤病毒感染番鸭细胞凋亡及免疫指标的影响。本试验将120只健康雏番鸭随机分成A、B、C、D、E和F组（每组20只）,E、F组和其他各组分室隔离饲养。从1日龄起对A、B、C各组分别在饮水中高、中、低剂量的猴头菇多糖（添加量为300mg/L、200mg/L、100mg/L）;D为采用同居感染的病毒对照组;E组为猴头菇多糖对照组,F为空白对照组,自由饮水给药。另取20只1日龄雏番鸭人工肌肉注射感染呼肠孤病毒,3日龄时,A、B、C和D组每组各放5只番鸭同居感染。分别于攻毒后2d、6d、9d、12d采样,运用病理组织学、免疫组织化学及原位末端标记法等多种研究方法,对番鸭呼肠孤病毒感染番鸭的组织病理学变化进行了动态的观察,重点观察了感染番鸭的肝脏、脾脏、胸腺、法氏囊等4个组织的细胞凋亡以及死亡因子Fas-L的动态变化,结果如下:攻毒各组雏番鸭都出现了呼肠孤病毒感染的典型临床症状,但猴头菇高中低剂量组出现相应的临床症状的时间比病毒对照组要迟,且死亡率低。剖检结果:攻毒各组雏番鸭表现出不同程度的病理变化,病毒对照组肝脾出现了许多灰白色坏死灶,而多糖给药组未见明显坏死灶。感染番鸭的组织病理学变化显示:攻毒各组雏番鸭的器官发生不同程度变性、细胞坏死及血管扩张充血,病灶区及血管周围淋巴细胞、单核细胞明显浸润。脾脏、胸腺和法氏囊等免疫器官的淋巴细胞坏死,数量明显减少。但多糖给药组的雏番鸭与病毒对照组相比,组织病变较不严重。如多糖给药组雏番鸭的肝静脉周围只有少量淋巴细胞浸润,脾小结的体积明显增大、数量增多,淋巴细胞数目也有所恢复。TUNEL检测结果显示:攻毒各组多种组织器官中出现大量TUNEL染色阳性细胞,表明番鸭呼肠孤感染会引起肝脏、脾脏、胸腺、法氏囊等发生不同程度的细胞凋亡。试验还发现,与病毒对照组雏番鸭相比,给药组雏番鸭出现细胞凋亡的时间提前,即在病毒感染的早期促进细胞凋亡,晚期抑制细胞凋亡。且病毒对照组雏番鸭相应组织细胞凋亡呈弥散型的分布,多糖给药组的雏番鸭对应组织细胞则呈成簇的凋亡,添加猴头菇多糖后的这种凋亡方式可能有利于阻止病毒在细胞中扩散,甚至有利于机体清除病毒。此项研究为国内首次报道。对感染番鸭的各个组织中死亡因子Fas-L的动态研究结果,试验各种组织Fas-L阳性反应的强弱与TUNLEL染色后细胞凋亡的指数高低相一致,表明番鸭呼肠孤病毒引起细胞凋亡的机制与FaS-L密切相关。被感染病毒后番鸭肝脏、脾脏、胸腺、法氏囊等组织中均可观察到明显的FaS-L阳性细胞。但与病毒对照组相比,给药组在病毒感染后期FaS-L阳性细胞较少。表明猴头菇多糖可防止病毒感染后期肝脏和免疫器官的过度凋亡。试验还用相同方法同居感染雏番鸭12d后进行无菌采血,分离血清,检测感染番鸭的各项生化指标。结果表明,猴头菇多糖能提高患鸭的免疫水平和抗氧化能力,对患鸭的肝、脾、胸腺和法氏囊都有积极的保护作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 综述
• 1. 禽（番鸭）呼肠孤病毒简介
• 1.1 病毒的分类归属
• 1.2 病原学特征
• 1.2.1 病毒特征
• 1.2.2 抗原性
• 1.2.3 培养特性
• 1.3 流行病学
• 1.4 临床症状
• 1.5 剖检结果和组织病变
• 1.6 防治体会
• 2 病毒感染与细胞凋亡
• 2.1 细胞凋亡的概念
• 2.2 细胞凋亡的生化特征和形态学特征
• 2.2.1 生化特征
• 2.2.2 形态学特征
• 2.3 细胞坏死与凋亡的区别
• 2.4 细胞凋亡的检测方法
• 2.5 细胞凋亡的机制
• 2.6 影响细胞凋亡的因素
• 2.6.1 钙稳态失衡
• 2.6.2 凋亡蛋白酶
• 2.6.3 氧化损伤
• 2.6.4 基因调控
• 2.6.4.1 Fas/Apo-1 及Fas-L 系统
• 2.6.4.2 野生型P53 与突变型P53
• 2.6.4.3 caspase 家族
• 2.6.4.4 TNF-α/THFR1 系列
• 2.6.4.5 凋亡调节蛋白bcl-2/bax
• 2.6.4.6 c-myc 基因
• 2.7 病毒感染与细胞凋亡
• 2.7.1 病毒感染诱导凋亡
• 2.7.2 病毒感染抑制凋亡
• 2.7.3 细胞凋亡对宿主感染病毒的利与弊
• 3. 真菌多糖的研究进展
• 3.1 免疫调节功能
• 3.1.1 对细胞免疫的影响
• 3.1.2 对体液免疫的影响
• 3.1.3 对细胞因子的影响
• 3.1.4 对补体系统的影响
• 3.1.5 对红细胞免疫的影响
• 3.2 抗病毒作用
• 3.3 抗氧化作用
• 3.4 对细胞凋亡的影响
• 3.5 保肝作用
• 3.6 抗肿瘤作用
• 4 研究的目的和意义
• 4.1 本试验猴头菇多糖的简介
• 4.2 本研究的目的和意义
• 第一章 猴头菇多糖对番鸭呼肠孤病毒感染后组织病变及细胞凋亡的影响
• 1. 材料与方法
• 1.1 试验毒株
• 1.2 实验中药
• 1.3 主要仪器设备
• 1.4 主要试剂
• 1.5 方法
• 1.5.1 试验分组
• 1.5.2 临床观察
• 1.5.3 剖检观察
• 1.5.4 病理组织切片常规HE 染色观察
• 1.5.5 原位末端标记法检测细胞凋亡
• 1.5.6 检测Fas-L 蛋白表达情况
• 1.6 数据统计处理
• 2. 结果与分析
• 2.1 试验番鸭的临床症状分析
• 2.2 试验各组剖检结果及分析
• 2.3 番鸭呼肠孤病毒人工感染番鸭的病理组织学变化的动态观察
• 2.4 原位末端标记检测结果
• 2.4.1 试验各组细胞凋亡分布情况
• 2.4.2 凋亡率统计结果
• 2.5 Fas-L 检测结果
• 2.5.1 肝脏组织细胞的Fas-L 检测结果
• 2.5.2 脾脏组织细胞的Fas-L 检测结果
• 2.5.3 胸腺组织细胞的Fas-L 检测结果
• 2.5.4 法氏囊组织细胞的Fas-L 检测结果
• 3. 讨论
• 3.1 试验对照组胸腺和法氏囊Fas-L、TUNEL 检测出现阳性的原因分析
• 3.2 猴头菇多糖拮抗呼肠孤病毒感染所致的免疫抑制的原因
• 3.3 猴头菇多糖的保肝作用
• 3.4 猴头菇多糖调控细胞凋亡的作用
• 第二章 猴头菇多糖对感染呼肠孤病毒雏番鸭的免疫功能的影响
• 1. 材料与方法
• 1.1 试验毒株
• 1.2 实验中药
• 1.3 主要仪器
• 1.4 主要试剂
• 1.5 方法
• 1.5.1 动物的分组和处理
• 1.5.2 样品的测定
• 1.6 数据统计处理
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 第三章 猴头菇多糖对感染呼肠孤病毒雏番鸭的血清蛋白含量及转氨酶活性的影响
• 1. 材料与方法
• 1.1 试验毒株
• 1.2 实验中药
• 1.3 主要仪器
• 1.4 主要试剂
• 1.5 方法
• 1.5.1 动物的分组和处理
• 1.5.2 样品的测定
• 1.6 数据统计处理
• 2. 结果
• 2.1 试验番鸭血清ALT 与 AST 含量的变化
• 3. 讨论
• 第四章 猴头菇多糖对感染呼肠孤病毒雏番鸭的抗氧化作用
• 1. 材料与方法
• 1.1 试验毒株
• 1.2 实验中药
• 1.3 主要仪器
• 1.4 主要试剂
• 1.5 方法
• 1.5.1 动物的分组和处理
• 1.5.2 样品的测定
• 1.6 数据统计处理
• 2. 结果
• 2.1 试验番鸭血清抗氧化指标的变化
• 3. 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢