大鼠皮层神经元和骨骼肌细胞电生理特性的比较

论文摘要

目的用全细胞膜片钳记录技术研究体外培养的皮层神经元和骨骼肌细胞（以下简称肌球）的离子通道特性,以达成如下目的:1.在本实验室建立全细胞膜片钳记录技术;2.观察皮层神经元电压门控性离子通道的基本特性以及乙酰胆碱对皮层神经元自发性兴奋性突触后电流（sEPSC）的影响;3.观察肌球电压门控性离子通道的基本特性;4.比较皮层神经元和肌球电压门控性离子通道特性的差别。方法采用机械吹打、胰酶消化等方法,纯化培养得到肌球和皮层神经元,建立本室全细胞膜片钳记录技术,并记录肌球和皮层神经元的电压门控性离子通道的INa、IK、ICa,以及皮层神经元的sEPSC,并对两种细胞的电压门控性离子通道特性进行比较研究。结果1.培养出适合全细胞膜片钳记录技术应用的皮层神经元和肌球。2.皮层神经元膜离子通道电流（1）阻断钾、钙通道记录到钠电流,从I-V曲线观察该电流一旦激活迅速达峰,并快速衰减,对TTX（1μmol/L）敏感。15例细胞钠通道半复活时间平均值为3.92±0.68 ms。（2）分离出的钾电流包括IA和IK。其中IA对4-AP（1mmol/L）敏感,IK失活缓慢（100 ms刺激时程内未见衰减）,对TEA（10 mmol/L）敏感且有外向整流特性。（3）记录到的钙电流幅值较低。（4）ACh（2 mmol/L）使皮层神经元的sEPSC的发放频率和幅值增加。3.肌球膜离子通道电流（1）记录到的钠电流一旦激活就迅速达峰值并快速衰减;对TTX（1μmol/L）敏感;15例细胞钠通道失活后的半复活时间平均值为15.52±1.03 ms。（2）肌球上钾电流仅记录到IK,该电流100 ms刺激时程内未见衰减,对TEA（10 mmol/L）敏感,有外向整流特性。（3）阻断钠、钾电流记录到钙电流。4.皮层神经元和肌球电压门控性离子通道特性的比较（1）皮层神经元和肌球钠通道激活迅速,对TTX敏感,但肌球钠通道恢复较皮层神经元慢。（2）皮层神经元和肌球均记录出IK,且IK在两种细胞上失活均缓慢,100 ms刺激时程内未见衰减,有外向整流特性。皮层神经元上还可记录到IA。结论1.建立了适合全细胞膜片钳记录技术应用的皮层神经元培养技术和肌球培养技术;2.用培养的皮层神经元和肌球建立了比较稳定的全细胞膜片钳记录技术;3.本室全细胞膜片钳记录技术能记录到皮层神经元和肌球的电压门控性钠、钾、钙离子通道电流;并在皮层神经元上记录到sEPSC;4.皮层神经元和肌球电压门控性钾电流成分存在差别;5.乙酰胆碱对皮层神经元sEPSC有增强作用。

论文目录

• 实验研究
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• 前言
• 材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• M 电流的研究进展
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录