论文摘要
目的建立新生SD大鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)模型,动态观察新生大鼠NEC发病过程中肠细胞凋亡率和肠组织一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性变化及其与肠损伤关系,为阐明NEC发病机制、寻找有效治疗药物提供实验依据。方法SD新生大鼠出生48小时开始给予鼠配方奶人工喂养,100%氮气缺氧90秒,4℃冷刺激10分钟,每天2次,连续3天,建立新生SD大鼠NEC模型。40只新生SD大鼠随机分成模型组(M)32只,对照组(C)8只。模型组开始缺氧冷刺激后24小时(M24)、48小时(M48)、72小时(造模结束,M72)及最后一次缺氧+冷刺激后24小时(M96)空腹分别断头处死8只,实验结束时处死对照组大鼠,留取肠管进行电镜观察及肠细胞凋亡率检测(流式细胞仪)。40只新生SD大鼠,按上述分组和实验方法,采用化学比色法检测肠组织NO含量和NOS活性。所有新生鼠均取回盲部近端肠管进行病理学检查及肠损伤评分。采用SPSS11.0统计学软件进行统计分析,α=0.05为显著性检验标准。结果[1]开始造模后,模型组相继出现腹泻、腹胀、萎靡、活动减少,生长减慢;透射电镜示肠黏膜出现大量凋亡细胞,有些形成凋亡小体。[2]对照组肠组织损伤评分和肠细胞凋亡率(%)分别为0.08±0.15、4.8±2.9;M24、M48、M72和M96肠组织损伤评分分别为1.38±0.42、1.46±0.69、1.58±0.30和3.33±0.59,肠组织细胞凋亡率分别为12.8±6.3、14.9±5.5、17.7±5.5和27.6±9.9。肠损伤程度与肠组织细胞凋亡率含量呈显著正相关(r凋亡率=0.853,p<0.01)。[3]M24、M48、M72、M96及对照组肠组织NO含量(μmol/gprot)分别为0.94±0.44、2.07±0.38、2.88±0.32、3.09±0.40和3.98±1.15,肠组织tNOS活性(U/mgprot)为1.49±0.25、2.21±0.42、2.77±0.58、2.95±0.32和3.80±1.08,iNOS活性(U/mgprot)为0.55±0.23、1.25±0.27、1.94±0.46、2.06±0.18和2.86±1.07。肠组织NO、tNOS、iNOS含量与相应平均肠组织损伤程度均呈显著正相关关系(r分别为0.865、0.743、0.807,P均<0.05)。结论在鼠配方奶喂养+反复缺氧冷刺激后,肠细胞凋亡率明显增加,肠组织NO含量和tNOS活性,特别iNOS活性明显升高;随时间延长,肠细胞凋亡增加、肠组织iNOS表达上调及NO含量升高程度进一步加重。肠细胞凋亡可能是造成新生鼠NEC肠道进行性损伤病理基础,肠细胞非正常凋亡增加可增加肠上皮通透性,启动细菌移位和机体有害的炎症级联反应。NO在NEC肠屏障损伤发病机制中起重要作用,持续过度表达NO及其代谢产物介导黏膜损伤和肠屏障功能障碍,从而引发NEC发生。
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