SARS-CoV结构蛋白的表达、纯化和鉴定及中国家养果子狸类SARS-CoV病毒的血清学检测

论文摘要

本论文在原核表达系统中对SARS-CoV 的主要结构蛋白基因进行了克隆、表达与多克隆抗体制备,同时对中国家养果子狸类SARS-CoV 病毒流行情况在血清学检测方面做了初步研究,论文包括四个章节。 第一章对SARS-CoV 近年的研究进展作了简要综述,并对本研究的背景和目的意义作了简要介绍。 第二章对SARS-CoV 的主要结构蛋白基因基因进行了克隆、原核表达、纯化与多克隆抗体制备。根据SARS-CoV 基因组全序列,设计相应的引物,用RT-PCR 的方法扩增得到S, S1, S2, S△,M, E, N,ORF03,ORF08 基因。将这些结构蛋白基因分别克隆至原核表达载体pGEX-KG,经IPTG 诱导,S1,S2, S△,M,E, N,ORF08 基因在E.coli BL21 （DE3）菌株中得到了高效表达。表达的目的蛋白大小分别为98 kDa,86 kDa, 58 kDa,52 kDa,34 kDa,74 kDa,38 kDa,我们纯化了其中的5 种蛋白GST-S2, GST-S△, GST-E, GST-N , GST-08,并用纯化了的蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,1:2000 倍稀释后用于Western Blot 分析,获得特异性显色信号,所得重组蛋白和抗体将用于SARS-CoV 的诊断、亚单位疫苗的研究。另外我们对所纯化蛋白做免疫原性的初步分析,发现GST-N 蛋白免疫小鼠可以产生较强的免疫应答,其抗体与灭活SARS-CoV 病毒产生特异性的反应,表明该蛋白具有较强的免疫原性,适用于SARS 的早期检测。第三章主要内容为家养果子狸类SARS-CoV病毒的血清学检测。我们在2003年和2004 年从不同的养殖场收集了110 份家养果子狸的血清,这些血清来自于中国四个省五个地区不同的养殖场,这些养殖场都在较为偏远的山区且没有受2003 年SARS 流行的影响。我们用两种不同的方法（Western blot 和ELISA）检测中国家养果子狸血清中的抗体,结果显示84%的样品含有抗SARS-CoV 的抗体,ELISA 检测还发现来自于不同地区的家养果子狸血清样品含有抗SARS-CoV

论文目录

• 第一章 前言综述
• 第二章 SARS-CoV 结构蛋白的表达、纯化和鉴定
• 第三章 家养果子狸类SARS-CoV 病毒的血清学检测
• 第四章 总结
• 参考文献
• 已发表的论文
• 致谢