RhaFGF联合rhEGF促进兔耳全层皮肤缺损创面愈合的实验研究

论文摘要

目的:观察重组人酸性成纤维细胞生长因子（rhaFGF）联合重组人表皮细胞生长因子（rhEGF）对创面愈合的影响并探讨其可能的机理。方法:①造模及分组:建立新西兰大耳白兔兔耳全层皮肤缺损模型,先后进行浓度梯度实验和联合用药实验。在浓度梯度实验中,建立兔耳全层皮肤缺损创面模型,随机分为A组（rhaFGF 60U/cm2）、B组（rhaFGF 90U/cm2）、C组（rhEGF 20U/cm2）、D组（rhEGF 40U/cm2）和E组（等量生理盐水）共5组。根据浓度梯度实验结果设定联合用药实验试剂的浓度。联合用药实验建立模型同前,随机分为F组（rhaFGF 60U/cm2+rhEGF 20U/cm2）、G组（rhaFGF 60U/cm2）、H组（hbFGF 60U/cm2）和I组（等量生理盐水）共4组。②实验方法:造模后即开始用药,每隔两日按不同分组将试剂外用于创面。③实验评估:采用透明膜描记法记录造模后第3、7、10、14d创面愈合面积,计算出创面愈合率,记录创面愈合时间。分别比较A、B、E组,C、D、E组的创面愈合率和愈合时间。联合用药实验,在第3、7、14d取创面组织,分别用HE染色、免疫组织化学检测血管内皮生长因子（VEGF）和基质金属蛋白酶-1（MMP-1）,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测VEGF mRNA的表达变化规律,观察不同时相点创面愈合情况。结果:①创面愈合时间。A组创面平均愈合时间为（13.57±0.40）d,在第7、10、14d创面愈合率与E组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。C组创面平均愈合时间为（14.01±0.25）d,在第7、10、14d创面愈合率与E组比较差异具有统计学意义（P<0.05）。联合用药实验中,F组创面平均愈合时间为（13.33±0.12）d,与I组比较差异具有统计学意义（P<0.05）。各个时相点,其创面愈合率与I组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。②HE染色。造模后第3、7d,F和H组创面成纤维细胞（FB）、毛细血管生成较G、I组丰富。第14d,F组创面基本愈合,FB、毛细血管较其他对照组少;H组尚未完全愈合,其创面中FB增殖活跃,毛细血管数较多;G组组织学情况介于F、H组之间;各用药组的愈合情况优于I组。③MMP-1免疫组织化学。在造模后的第3d,各组已开始表达MMP-1,但无明显差异（P>0.05）。第7d,各组MMP-1含量均达峰值。与I组相比较,F组差异显著具有统计学意义（P<0.01）,G、H组差异具有统计学意义（P<0.05）。第14d,各组MMP-1量下降,F、G组显著少于I组且差异具有统计学意义（P<0.05）。在各组之中,H组表达最多,但与I组相比不具统计学意义（P>0.05）。④VEGF免疫组织化学。造模后第3d,各组VEGF蛋白表达未见明显差别（P>0.05）。第7d,各组VEGF表达达高峰,与I组相比较,F组差异具有显著统计学意义（P<0.01）,G、H组差异具有统计学意义（P<0.05）。第14d,各组VEGF下降。F组显著少于I组,差异具有统计学意义（P<0.01）。G组少于I组,差异具有统计学意义（P<0.05）,H组表达在各组中最多但与I组相比差异无统计学意义。④VEGF mRNA RT-PCR结果。第3d,各组mRNA表达未见明显差异;第7d时,F、G组与I组比较差异具有显著统计学意义（P<0.01）,H组差异具有统计学意义显著（P<0.05）;第14d,各组表达均有下降,但F、G组与I组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）,H组表达在各组中最多但与I组相比差异无统计学意义。结论:①F组对兔耳创面愈合有促进作用,可促进创面肉芽组织生长、毛细血管形成与再上皮化形成。②其促进创面愈合机制可能是在早期通过上调VEGF mRNA的表达、增加创面中VEGF和MMP-1量。在晚期,下调VEGF mRNA的表达、降低创面中VEGF和MMP-1的含量,可能是其减少瘢痕形成的机制。③联合应用细胞因子（rhaFGF+rhEGF）优于单独用药。

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 全文小结
• 参考文献
• 附图
• 文献综述 酸性成纤维细胞生长因子对创面愈合作用的研究进展
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间完成的论文