苦参碱对体外培养人胎肝细胞功能和凋亡的影响

论文摘要

目的:在培养基DMEM中加入不同浓度的苦参碱,对分离后体外培养的胎肝细胞进行干预,观察胎肝细胞生长情况、ALB、ALT、UA的水平、细胞凋亡率和XIAP的表达,了解苦参碱对胎肝细胞功能、增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制,为胎肝细胞永生化研究提供理论依据,为将苦参碱开发成为新型的肝细胞培养液奠定基础,为进一步探索为生物人工肝和肝细胞移植提供充足的活性肝细胞之可能。方法:将2mg/L、8mg/L、16mg/L、32mg/L、64mg/L的苦参碱加入胎肝细胞培养基DMEM中,设立DMEM组为空白对照,分别在12h、18h、24h、48h、72h检测不同浓度各组细胞的ALB、ALT、UA水平,采用流式细胞术观察各组细胞凋亡率,通过RT-PCR法检测XIAP的表达。结果:除64mg/L组外,其它各组ALB和UA含量均高于DMEM对照组,ALT含量均低于DMEM对照组,提示苦参碱具有保护肝细胞合成和分泌的功能,减轻分离对肝细胞的损伤,其中以8mg/L组作用最佳。除64mg/L组外,其它各组细胞凋亡率均低于DMEM对照组,提示苦参碱可抑制肝细胞凋亡,其中8mg/L组在各时点凋亡率最低,抗凋亡作用最强。RT-PCR法测XIAP的表达发现,除64mg/L组外,其它不同浓度各组细胞表达均高于DMEM对照组,其中8mg/L组上调XIAP表达的作用最强,而苦参碱上调胎肝细胞XIAP表达不同于肝肿瘤细胞中XIAP的持续高表达。结论:苦参碱具有保护肝细胞合成和分泌的功能,减轻分离对肝细胞的损伤,通过抑制细胞凋亡,促进细胞增殖,其作用可能是通过上调XIAP的表达来实现的。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 目录
• 前言
• 1 肝功能衰竭与人工肝治疗
• 1.1 肝衰竭临床治疗现状
• 1.2 人工肝研究发展状况
• 1.3 生物人工肝的临床评价和展望
• 1.4 生物人工肝中肝细胞的选用
• 2.人原代肝细胞的利用
• 2.1 人原代肝细胞的获取
• 2.2 人原代肝细胞的分离
• 2.3 人原代肝细胞的培养
• 3.关于苦参碱的研究概述
• 3.1 苦参碱的临床应用
• 3.2 苦参碱与肝细胞冻存和培养
• 4.细胞凋亡和凋亡抑制蛋白的研究
• 4.1 细胞凋亡
• 4.2 凋亡蛋白抑制因子概述
• 4.3 XIAP的结构和功能
• 5.本课题的目的及意义
• 材料与方法
• 1.实验材料
• 1.1 实验对象
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器
• 1.4 常用试剂的配制
• 2.实验方法
• 2.1 肝细胞获取
• 2.2 肝脏的分离
• 2.3 肝细胞分离
• 2.4 台盼蓝计数法
• 2.5 肝细胞分组培养
• 2.6 肝细胞形态学和生长情况观察
• 2.7 功能检测
• 3.流式细胞仪观察细胞的凋亡
• 4.RT-PCR测XIAP的表达
• 4.1 分组培养
• 4.2 总RNA的提取
• 4.3 合成cDNA
• 4.4 PCR反应
• 4.5 产物测定
• 5.统计学处理
• 结果
• 1.胎肝细胞形态观察
• 2.胎肝细胞分离后存活率和肝细数
• 3.各组细胞生长情况比较
• 4.胎肝细胞ALT分泌量化
• 5.各组胎肝细胞白蛋白合成量变化
• 6.各组胎肝细胞尿素合成变化
• 7.各组细胞凋亡率
• 8.各组细胞XIAP的表达
• 讨论
• 1.苦参碱对体外培养的胎肝细胞生长的影响
• 2.苦参碱对体外培养的胎肝细胞的保护作用
• 3.苦参碱对胎肝细胞凋亡的影响
• 4.苦参碱对XIAP表达的影响
• 5.进一步实验设计思路
• 6.苦参碱在生物人工肝治疗中的问题与展望
• 结论
• 参考文献
• 缩略词（Abbreviation）
• 读研期间发表论文
• 致谢