论文摘要
近年来,随着对肿瘤和干细胞生理研究的深入,越来越多的证据表明:肿瘤包含有一部分比例很小的肿瘤干细胞,这些肿瘤干细胞具有无限增殖、自我更新和多向分化潜能,并且驱动肿瘤生长。目前,已从多种肿瘤细胞系及肿瘤组织（包括白血病、神经胶质瘤、前列腺癌、结肠癌、胰腺癌、肺癌及乳腺癌等）中分离出肿瘤干细胞。根据肿瘤干细胞学说,这些肿瘤干细胞具有正常干细胞类似的特性,决定着肿瘤起始和增殖,因而可能影响临床肿瘤耐药、复发及转移等行为。因此,肿瘤干细胞的分离和鉴定成为肿瘤研究的新热点。原发性肝细胞癌是我国常见恶性肿瘤之一,其死亡率在所有恶性肿瘤中居第三位。在过去的几十年里,尽管在肝癌诊断及传统治疗上取得了巨大的进步,但肝癌患者长期生存率仍然很低,这主要是由于肝癌术后的高复发和高转移。因此,对肝癌的发病机理及其生物学特性的研究尤为必要。肝癌组织具有明显的形态学多样性,表达一系列谱系标志,同时肝癌细胞和干细胞存在某些共性。实际上,多个实验已经证实肝干细胞广泛的参与肝癌的发生和发展的各个阶段;尤其是最近,以CD133为标志成功从多个肝癌细胞系分离出肝癌干细胞:CD133+亚群具有无限增殖、自我更新和多向分化潜能,决定着肝癌的发生和发展,进一步支持CSC学说。此外,在大鼠大部分肝切除模型中检测到CD133的重新激活,表明CD133和肝细胞的增殖密切相关,可能和肝癌的发生有关。因此,展开以CD133为标志的肝癌干细胞的研究对于阐明肝癌的发病机理、揭示肝癌的耐药、复发和转移的机制具有重要的意义,并为肝癌的治疗提供一个新的策略。目的:1)检测干细胞标志CD133在临床肝癌组织标本中的表达情况,并分析CD133的表达和临床肝癌病理特征、病程进展及术后预后关系;2)检测化疗药物对肝癌细胞的杀伤作用,探讨转运蛋白ABCG2在CD133+肝癌CSC耐药中的作用。方法:1)采用免疫组织化学法检测63例肝癌癌组织CD133的表达,分析CD133表达与临床病理特征、肝癌进展及预后的相关性;2)流式检测CD133在肝癌细胞系中的表达;3)化疗药物对肝癌细胞杀死作用的研究;4)应用半定量RT-PCR检测ABCG2在CD133+及CD133-细胞的表达。结果:1)所有的63例肝癌标本中均检测到CD133表达,其中增强的CD133表达占26例（41.3%）,4例胎肝组织CD133染色阳性,但正常肝组织CD133不表达;2)增强的CD133表达和肝癌的临床分期（P﹤0.01）、病理分级（P﹤0.01）及血浆AFP水平（P﹤0.05）密切相关;3) Kaplan–Meier分析表明:和低表达的CD133相比,增强者生存时间更短（P﹤0.01）而肝癌复发率增高（P=0.01）;多参分析提示:增强的CD133表达是肝癌患者长期生存（相对危险度RR=2.443,P=0.017）及肝癌复发（相对危险度RR=2.445,P=0.011）)的一个独立预后因子;4)流式检测结果显示:CD133分子的表达在肝癌细胞系普遍存在,其含量是0.1-61%;5)化疗药物对CD133-肝癌细胞有选择性杀伤作用;6)半定量RT-PCR结果都证实ABCG2优先表达于CD133+肝癌CSC（P﹤0.05）;结论:1)重新激活的CD133+CSC在临床肝癌标本中普遍存在; 2) CD133+ CSC不仅参与了肝癌的起始,而且可能在肝癌进展中扮演着重要的角色;3) CD133的表达倾向于恶性程度较高的肝癌,因此可能影响肝癌患者的预后,这些结果进一步支持CSC假说;4) ABCG2的优先表达可能是CD133+CSC耐药机制之一;因此,除了抗凋亡通路的激活,CD133+CSC耐药可能和多个通路异常有关。