鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物双圈耐药现象的研究

论文摘要

鲍曼不动杆菌是导致医院内感染的一种重要的条件致病菌,尤其是在重症监护病房（ICU）的病人中。引起院内感染的病原菌多数为耐药菌,对包括β-内酰胺类、氨基糖苷类及喹诺酮类在内的多种抗生素均耐药,因此给临床治疗造成极大的困难。氨基糖苷类抗生素临床应用广泛,尤其是在治疗革兰阴性菌引起的危重感染时。该抗生素通过与原核生物30S核糖体亚基16S rRNA高度保守的A位点结合而阻碍蛋白质的合成,继而导致细菌死亡。耐该类抗生素的机制主要包括产氨基糖苷修饰酶、作用靶位改变、膜通透性降低和外排系统导致的细胞内药物浓度降低等多种因素。本文旨在探讨在K-B法药物敏感试验中对氨基糖苷类抗菌药物双圈耐药的鲍曼不动杆菌耐药基因携带状况、药物诱导对耐药基因mRNA表达量的影响以及全自动微生物鉴定及药敏分析仪VITEK2 Compact检测鲍曼不动杆菌对阿米卡星药物敏感试验的准确性及造成检测误差的原因。我们用PCR扩增法对编码整合子酶的基因和整合子可变区进行扩增,并联合RFLP和DNA测序技术分析可变区耐药基因。同时对4种常见的氨基糖苷修饰酶基因及3种16S rRNA甲基化酶基因armA,rmtB及rmtC进行扩增,对扩增结果为阳性的基因利用RT-PCR的方法分析阿米卡星诱导前后耐药基因表达量。结果发现：85.7%（48/56）的双圈耐药菌株检测到Ⅰ类整合子,RFLP分型和DNA测序结果表明,整合子可变区携带的基因盒为aacA4-catB-aadAl, aacCI-orfX-aadAl及dfrA17-aadA5。36株检测出aacA4,10株检测出aacC1,5株检测出aacC2,所有菌株均未检测出aphA6,其中2株同时检出aacA4和aacC2。所有双圈耐药菌株均检测到armA基因,未检测到rmtB及rmtC,敏感菌株和普通耐药菌检测3种甲基化酶基因均为阴性。RT-PCR结果显示经阿米卡星诱导后细菌armA基因mRNA表达量显著上升。VITEK2 Compact检测鲍曼不动杆菌对阿米卡星药物的结果误差主要出现在K-B法表型为双圈耐药的菌株,这些菌几乎均被误判为敏感。由此我们得出的结论：介导鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物双圈耐药的主要原因并非整合子可变区基因盒而是armA基因,该基因通过诱导表达产生的甲基化酶导致16S rRNA甲基化从而阻碍阿米卡星与药物靶位结合。此外,armA基因阳性的双圈耐药菌株在液体培养基中所产生的细菌浊度较低,VITEK2 Compact检测仪进行吸光度扫描时无法判定为细菌生长,误判为细菌生长被抑制,影响了临床报告的准确性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 第一章 绪论
• 1 鲍曼不动杆菌生物学特征
• 2 氨基糖苷类药物的分子结构,主要种类及作用机制
• 2.1 药理作用
• 2.2 作用机制与特点
• 2.3 代表药物
• 3 鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药机制
• 3.1 氨基糖苷修饰酶
• 3.2 16S rRNA甲基化酶
• 3.3 整合子-耐药基因盒系统
• 4 总结与展望
• 5 参考文献
• 第二章 鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物药敏试验
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 参考文献
• 第三章 介导阿米卡星双圈耐药表型鲍曼不动杆菌的相关基因研究
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 参考文献
• 第四章 造成VITEK 2 Compact全自动微生物仪检测鲍曼不动杆菌对阿米卡星敏感性检测误差原因的探讨
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 参考文献
• 综述 16S rRNA甲基化介导的氨基糖苷类药物耐药机制
• 参考文献
• 全文总结
• 附录: 硕士研究生期间论文发表情况
• 致谢