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重组人二型血红素加氧酶的表达、纯化及性质鉴定

2020-12-11阅读(332)

重组人二型血红素加氧酶的表达、纯化及性质鉴定

论文摘要

血红素加氧酶（HO）是广泛存在于哺乳动物细胞中的一类氧化酶,催化血红素氧化生成胆绿素,同时生成三价铁离子和一氧化碳（CO）。对调节体内离子平衡,参与机体免疫反应及调节神经系统功能均有重要影响。血红素加氧酶（HO）存在三种异构体,血红素加氧酶Ⅰ（HO-1）、血红素加氧酶Ⅱ（HO-2）和血红素加氧酶3（HO-3）,前两种异构酶功能相似,但分布不同且有着不同的反应动力学,第三种目前尚未得到清楚的研究,情况不明。本文在获得HMOX2全长cDNA的基础上,将HMOX2克隆至高表达载体（pT7N10C6）,原核表达了包含有人同源性血红素氧化酶Ⅱ（HMOX2）的全长序列的重组蛋白（His10-HMOX2）,每升菌液通过亲和层析和阴离子交换层析纯化蛋白,最终约可获得92.6 mg纯度为92%蛋白质样品。通过活性检测,其活性可达到69.51U。与已报道的血红素氧化酶活性相比较,His10-HMOX2具有与之相当的酶活性。同时,通过改变反应温度（20-95℃）,pH值（pH 6-9）等条件,检测到His10-HMOX2的催化活性,40℃和pH值为8时表现为最高,其他条件下逐次下降。为将来进一步的研究提供了有益的参考。同时,我们也表达了两个该蛋白的突变体,His10-H152A和His10-K89E,通过同样的纯化手段,其产量和纯度与His10-HMOX2相当,但是基本不具备该酶活性,与以往的报道一致。为更清楚理解该酶生化功能与相关疾病研究提供了帮助。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 常用缩写
  • 文献综述
  • 1.血红素及其代谢
  • 2.CO：血红素分解代谢的主要标志
  • 3.胆红素IXa：抗氧化链的一员
  • 4.血红素氧化酶
  • 5.血红素氧化酶缺乏症
  • 6.血红素氧化酶的可能功能
  • 材料与方法
  • 结果与讨论
  • 10-HMOX2融合蛋白的构建'>1.His10-HMOX2融合蛋白的构建
  • 10-HMOX2的表达与纯化'>2.His10-HMOX2的表达与纯化
  • 3.超滤浓缩
  • 10-HMOX2的酶活检测'>4.His10-HMOX2的酶活检测
  • 讨论
  • 参考文献
  • 附录
  • 致谢

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