论文摘要
应用飞行质谱技术从血清中筛选肠癌标志蛋白前言随着蛋白组学的提出和人类DNA框架基本完成，生命科学进入了后基因时代。研究目标从单个基因转向一群基因（基因组）和功能基因，从遗传信息转向生物功能，开始从整体组织和细胞内的蛋白质角度研究生命活动的基本规律。基因组序列翻译为相应功能蛋白，使生物学功能得以实现。但二维的基因组学难以充分预测蛋白质的三维结构及其动力学，基因本身有多态性，使基因有多种表型，给单纯基因诊断带来了不确定因素。要彻底了解生命本质，必须了解蛋白质在生命现象中的作用和相应的机制。蛋白结构或量的变化导致了疾病的发生。机体内绝大多数调控过程、疾病的发生机制、药物的靶标均发生在蛋白水平。有人认为，后基因组学，特别是蛋白组学将成为21世纪生命科学研究最重要的内容。就临床角度而言，蛋白组学更具有应用价值。实际应用表明，对如癌症、心血管病这些多基因疾病，基因诊断阳性率远低于单基因遗传性疾病。比较疾病组织和正常组织的蛋白组的差异往往能鉴别出特定疾病对应的特异蛋白，使之成为疾病的标记或药物的靶分子。现有的蛋白质分析方法只能检测1 000余种蛋白，按现有技术，大量的可能携带疾病信息的蛋白无法检出。实际上，有效的单一蛋白质标志极少，许多重要的疾病由于缺乏好的标志导致诊断不精确或诊断不及时。许多学者深信，如果能根据一组蛋白质的变化来判断疾病，预测和诊断疾病的准确性将大大提高。检测疾病的蛋白组学变化将比当前常规检测、基因检测更准确、有效。许多疾病将出现新的诊断指标，大大改变当前诊断学的落后状态。亚利桑那大学癌症中心主任Daniel D．Von Hoff认为，应用SELDI-TOF测定蛋白组学最有价值，血清蛋白组学图谱的应用，将为肿瘤学的理论和实际工作带来重大影响，在很大程度上改变肿瘤的治疗和预防措施。SELDI-TOF-MS是一种应用特殊的增强表面芯片结合激光解吸离子化飞行时间质谱分析样品中蛋白质的技术，具有微量、快速、高通量等特点，尤其适于分析低分子量、低丰度的蛋白质。2002年日本田中耕一因发明该技术而获取诺贝尔化学奖，SELDI技术发展十分迅速。本研究是利用SELDI-TOF-MS技术分析肠癌患者与正常人血清中蛋白质成分的变化，以获得用于肠癌诊断的特异性相关蛋白。材料与方法用美国Ciphergen Biosystems公司金属螯合表面芯片IMAC-Cu和蛋白芯片仪，检测结直肠癌患者和正常人血清蛋白质的相对含量，应用Biomarker Wizard软件分析肠癌组与对照组间相同质荷比的蛋白质峰值表达差异的P值，筛选可用于结直肠癌早期诊断的血清蛋白质特异性生物标志物。结果结果发现有两组蛋白存在差异，分子量为3774Da，1185IDa，其中3774Da在患者的血清中低表达，11851Da在患者血清中高表达．结论血清中质荷比3374Da和11851Da的2个蛋白质相对含量在2组中的差异有显著意义，2个蛋白质所组合成的分组检测结直肠癌的敏感度92.31％和特异性100％。说明该方法对结直肠癌的诊断有重要意义，可作为临床上诊断的指标之一。