聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯修饰脂质体作为阿霉素载体的研究

论文摘要

聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯（TPGS）分子结构有亲水基团和亲油基团而有表面活性,且因其独特的性质,TPGS被用作增溶剂、乳化剂、吸收促进剂以及控制药物释放的载体,TPGS还能够抑制P-gp蛋白和增加抗肿瘤药物如阿霉素、长春碱和紫杉醇的毒性因而被广泛应用应用于药剂学中。本研究中,用硫酸铵梯度法制备TPGS修饰的阿霉素脂质体,并对其理化性质和普通脂质体做了比较。用阳离子交换树脂吸附法测定药物包封率,用透析法测定其体外释放,透射电镜观察脂质体形态,激光粒度测定仪测定粒度分布和Zeta电势,并考查了脂质体稳定常数Ke、药物泄漏率以及胎牛血清对脂质体粒度的影响。结果表明TPGS修饰的脂质体形态规整,药物包封率大于95%,TPGS修饰后能显著提高脂质体的贮藏以及在血清中的稳定性,大大降低药物泄漏率,而体外释放快于普通脂质体。以SD大鼠为受试动物研究比较了TPGS修饰的阿霉素脂质体与游离药物和普通阿霉素脂质体的血浆药代动力学。用DAS2.1.1非房室模型处理药动学数据并计算药动学参数。结果表明脂质体的血药浓度时间的特性与游离药物完全不同,AUCO-24h显著增加,V0-24h显著减小。另外通过对比TPGS修饰的脂质体和普通脂质体,表明修饰脂质体的AUCO-24h大于普通脂质体,但是MRTO-24h/于普通脂质体。研究了各种剂型对MCF-7细胞和MCF-7/ADR细胞摄取实验和体外毒性。发现TPGS修饰的阿霉素脂质体较游离药物和普通阿霉素脂质体促进了阿霉素在MCF-7/ADR细胞中药物摄取,但是在MCF-7细胞中,游离药物组的细胞摄取最高。值得一提的是,在MCF-7/ADR细胞的摄取实验中,用蔗糖外液制备的阿霉素脂质体中的药物摄取比用HBS外相介质细胞药物摄取高1倍。在细胞毒性实验中,表明了TPGS能够提高了阿霉素对MCF-7和MCF-7/ADR的毒性,也表明了TPGS在耐药逆转中发挥作用。最后,以荷H22瘤ICR小鼠为动物模型,评价了各剂型的在体抗肿瘤药效。以尾静脉给与生理盐水的小鼠组为阴性对照,分别在接种肿瘤的第5,7,9,11天给予5mg/kg等剂量的阿霉素的各药物剂型。相对于游离阿霉素和普通阿霉素脂质体组,TPGS修饰的阿霉素脂质体显示了更强的肿瘤生长抑制能力并显著的降低了给药小鼠的肿瘤重量,结果表明其提高了阿霉素的抗肿瘤药效。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第1章 TPGS修饰的阿霉素脂质体制备
• 1.1 仪器与材料
• 1.1.1 试剂
• 1.1.2 仪器
• 1.2 方法与操作
• 1.2.1 脂质体制备方法的选择
• 1.2.1.1 逆相蒸发法制备阿霉素
• 1.2.1.2 薄膜法制备阿霉素脂质体
• 1.2.1.3 硫酸铵梯度法制备阿霉素脂质体
• 1.2.2 紫外分光光度测定阿霉素的含量
• 1.2.2.1 标准曲线的绘制
• 1.2.2.2 方法精密度
• 1.2.2.3 加样回收率
• 1.2.3 阳离子交换树脂柱测定包封率
• 1.2.3.1 阳离子树脂的活化
• 1.2.3.2 阳离子树脂对游离阿霉素的吸附能力考察
• 1.2.3.3 脂质体包封率的测定
• 1.2.4 阿霉素脂质体制备工艺考察
• 1.2.4.1 空白脂质体的制备
• 1.2.4.2 孵育温度对包封率的影响
• 1.2.4.3 药脂比对包封率的影响
• 1.2.4.4 孵育时间对包封率的影响
• 1.3 结果和讨论
• 1.3.1 阿霉素脂质体制备方法的选择
• 1.3.2 紫外分光光度测定阿霉素的含量
• 1.3.2.1 阿霉素的紫外标准曲线
• 1.3.2.2 日内、日间精密度
• 1.3.2.3 加样回收率
• 1.3.3 阳离子交换吸附测定脂质体的包封率
• 1.3.4 脂质体制备工艺的考察
• 1.3.4.1 孵育温度对包封率的影响
• 1.3.4.2 药脂比对包封率的影响
• 1.3.4.3 孵育时间对包封率的影响
• 1.3.4.4 最终处方和制备工艺
• 1.4 小结
• 第2章 TPGS修饰的阿霉素脂质体理化性质考察
• 2.1 仪器与材料
• 2.1.1 试剂
• 2.1.2 仪器
• 2.2 方法和操作
• 2.2.1 脂质体形态的观察
• 2.2.2 粒径分布和Zeta电位
• 2.2.3 DSC测定成份的相互作用
• 2.2.4 稳定常数的测定
• 2.2.5 体外释放实验
• 2.2.5.1 荧光分光光度法测定阿霉素含量
• 2.2.5.2 体外释放方案
• 2.2.6 泄漏率考察
• 2.2.7 脂质体在血清中的稳定性考察
• 2.3 结果和讨论
• 2.3.1 脂质体的形态观察
• 2.3.2 脂质体的粒径分布
• 2.3.3 Zeta电位
• 2.3.4 TPGS对磷脂双分子层的影响
• 2.3.5 稳定常数
• 2.3.6 体外释放试验
• 2.3.6.1 阿霉素的荧光标准曲线
• 2.3.6.2 阿霉素脂质体体外释放对照
• 2.3.7 泄漏率试验
• 2.3.8 血清中稳定性
• 2.4 小结
• 第3章 TPGS修饰的阿霉素脂质体的药动学
• 3.1 仪器与材料
• 3.1.1 试剂
• 3.1.2 仪器
• 3.1.3 实验动物
• 3.2 方法和操作
• 3.2.1 HPLC测定血浆中阿霉素的含量
• 3.2.1.1 色谱条件
• 3.2.1.2 阿霉素储备液
• 3.2.1.3 内标溶液的配置
• 3.2.1.4 阿霉素标准储备液
• 3.2.1.5 血浆样品处理
• 3.2.1.6 血浆样品标准曲线的绘制
• 3.2.1.7 精密度和回收率考察
• 3.2.2 给药和采血方案
• 3.2.3 药动学数据处理
• 3.3 结果和讨论
• 3.3.1 HPLC用于血浆中阿霉素的含量测定
• 3.3.1.1 色谱条件优化
• 3.3.1.2 方法专属性
• 3.3.1.3 血浆样品的标准曲线
• 3.3.1.4 精密度和回收率考察
• 3.3.2 药动学参数讨论
• 3.4 小结
• 第4章 TPGS修饰阿霉素脂质体对MCF-7和MCF-7/ADR细胞株的抗肿瘤活性
• 4.1 仪器与材料
• 4.1.1 试剂
• 4.1.2 仪器
• 4.1.3 细胞株
• 4.2 方法和操作
• 4.2.1 细胞培养
• 4.2.2 HPLC测定细胞内阿霉素含量
• 4.2.2.1 HPLC色谱条件
• 4.2.2.2 方法专属性
• 4.2.2.3 细胞样品处理
• 4.2.2.4 细胞匀浆的标准曲线的绘制
• 4.2.2.5 方法精密度
• 4.2.3 MCF-7细胞和MCF-7/ADR细胞摄取
• 4.2.3.1 细胞匀浆蛋白质浓度的测定
• 4.2.3.2 药物摄取方案
• 4.2.3.3 相关代谢产物量随时间的变化
• 4.2.4 荧光显微镜观察细胞的药物摄取
• 4.2.5 细胞毒性实验
• 4.2.5.1 含阿霉素的不同处方的系列浓度的配置
• 4.2.5.2 MTT试验
• 4.2.5.3 耐药逆转
• 4.3 结果和讨论
• 4.3.1 HPLC测定细胞内阿霉素浓度
• 4.3.1.1 色谱行为
• 4.3.1.2 细胞匀浆的标准曲线
• 4.3.1.3 方法精密度
• 4.3.2 MCF-7细胞和MCF-7/ADR细胞的体外药物累积
• 4.3.3 相关代谢产物随时间的变化
• 4.3.4 荧光显微镜观察细胞对阿霉素的摄取
• 4.3.5 细胞毒性试验
• 4.4 小结
• 第5章 TPGS修饰阿霉素脂质体的体内药效学考察
• 5.1 仪器与材料
• 5.1.1 试剂
• 5.1.2 仪器
• 5.1.3 实验动物和细胞株
• 5.2 方法和操作
• 5.2.1 药效学模型建立
• 5.2.2 小鼠分组及给药方案
• 5.2.3 绘制肿瘤生长曲线
• 5.2.4 抑瘤率
• 5.2.5 肿瘤病理学检查
• 5.3 结果和讨论
• 5.3.1 肿瘤生长曲线
• 5.3.2 瘤重抑制率
• 5.3.3 病理学检查
• 小结
• 全文总结
• 参考文献
• TPGS作为药用辅料的应用
• 参考文献
• 致谢