论文摘要
第一部分哮喘患者肺部γδT淋巴细胞比例和增殖活性的变化目的1、探讨哮喘患者肺部γδT淋巴细胞数量的变化。2、探讨哮喘患者肺部γδT淋巴细胞增殖活性的变化。3、评估磁性细胞分选器（MACS）纯化支气管肺泡灌洗液中γδT淋巴细胞的效果。方法1、收集哮喘和对照患者的支气管肺泡灌洗液。2、显微镜下观察支气管肺泡灌洗液中的细胞密度。3、对支气管肺泡灌洗液中的细胞进行分类计数。4、利用流式细胞术检测支气管肺泡灌洗液中γδT细胞的比例。5、用磁性细胞分选器纯化支气管肺泡灌洗液中的γδT淋巴细胞。6、通过台盼兰染色、荧光显微镜和流式细胞术来评估MACS纯化支气管肺泡灌洗液中γδT淋巴细胞的效果。7、对纯化的γδT淋巴细胞进行体外培养,通过MTT比色法检测γδT淋巴细胞的增殖活性。结果1、在纯化细胞之前,对支气管肺泡灌洗液中的细胞进行计数,哮喘患者组支气管肺泡灌洗液中的细胞密度为（22.5±4.5）×104个/毫升,高于对照组的（18.8±3.7）×104个/毫升,差异不显著（t=1.665、P＞0.05）。2、显微镜下对细胞进行分类计数,哮喘组的巨噬细胞比例为（81±4）%,低于对照组的（86±2）%,有统计学差异（t=3.122、P＜0.01）;哮喘组的淋巴细胞比例为（15±3）%,高于对照组的（13±2）%,但无统计学差异（t=1.490、P＞0.05）;哮喘组嗜酸性粒细胞的比例（3%）高于对照组（＜1%）;而中性粒细胞的比例（1%）也略高于对照组（＜1%）。3、流式细胞术检测表明,哮喘患者组支气管肺泡灌洗液中γδT淋巴细胞的百分率为（6.39±0.71）%,高于对照组的（2.62±0.37）%,差异显著（t=12.449、P＜0.01）。4、MACS纯化支气管肺泡灌洗液中的γδT淋巴细胞后,在荧光显微镜下观察,γδT细胞的比例明显增加,其它细胞基本消失。流式细胞术检测表明,γδT淋巴细胞的比例＞93%。台盼兰染色表明,细胞存活率＞95%。5、MTT法检测γδT淋巴细胞的增殖活性,哮喘患者组的OD值为0.201±0.024,高于对照组的0.155±0.032,差异具有显著性（t=3.042、P＜0.05）。结论1、哮喘患者肺部γδT淋巴细胞的比例明显升高。2、哮喘患者肺部γδY淋巴细胞的增殖活性显著增强。3、MACS可以有效地纯化支气管肺泡灌洗液中的γδT淋巴细胞,且不会对γδT淋巴细胞造成明显损伤。目的通过观察哮喘患者肺部γδT淋巴细胞所分泌细胞因子的变化，探讨肺部γδT细胞对哮喘患者气道炎症的影响。方法1、留取7例哮喘和7例对照患者的支气管肺泡灌洗液。2、用磁性细胞分选器（MACS）纯化其中的γδT细胞，进行体外培养。3、ELISA法检测γδT细胞分泌到培养基中IFN-γ和IL-4的浓度。结果1、哮喘组γδT细胞分泌的IFN-γ浓度为95．1+55．8（pg／m1），低于对照组的100．9+67．8（pg／m1），但差异不显著（P>0．05）。2、哮喘组γδT细胞分泌的IL-4浓度为18．9±3．1（pg／m1），高于对照组的14．1±3．0（pg／m1），差异显著（P<0．05）。结论1、哮喘患者肺部γδT细胞分泌的IFN-γ无明显变化。2、哮喘患者肺部γδT细胞可以通过加强分泌IL-4来增强Th2应答，达到加剧Th1／Th2失衡，加重气道炎症的目的。