应用RNAi逆转胃癌耐VCR细胞SGC7901/VCR多药耐药性的比较研究

论文摘要

目的：探讨靶向MDR1的siRNA、维拉帕米以及重组表皮生长因子EGF对人类耐长春新碱（VCR）胃癌细胞SGC7901／VCR多药耐药性的逆转作用。方法：1、通过浓度梯度递增法方法建立耐长春新碱的胃癌细胞系SGC7901／VCR。2、采用RT-PCR检测经靶向siRNA和维拉帕米处理前后MDR1基因mRNA表达水平的变化，以及经重组表皮生长因子处理前后TopoⅡα基因mRNA表达水平的变化；免疫组化方法检测经靶向siRNA和维拉帕米处理前后P-gp的变化以及经重组表皮生长因子处理前后TopoⅡα蛋白表达水平的变化；MTT方法检测经靶向siRNA、维拉帕米和重组表皮生长因子处理前后细胞对化疗药物敏感性的变化。结果：1、成功建立胃癌耐药细胞系SGC7901／VCR。2、SGC7901／VCR经转染靶向siRNA后，可引起：（1）靶向siRNA可以使SGC7901／VCR细胞的MDR1基因mRNA表达减弱（空白及空载对照MDR1相对表达量分别为0.759±0.035和0.743±0.045，而siRNA处理组为0.413±0.166，（P＜0.01））；（2）靶向siRNA可以使MDR1编码的P-gp表达降低（平均阳性细胞数比在空白组和空载组分别为（93±1）％和（92±1）％，而siRNA转染组降为（42±1）％，P＜0.01）；（3）靶向siRNA可以使SGC7901／VCR细胞增殖率明显下降，对长春新碱、丝裂霉素、替加氟等化疗药物的敏感性显著增加。3、SGC7901／VCR细胞经维拉帕米处理后，可引起：（1）维拉帕米在终浓度10μmol／L以上处理24小时者，MDR1基因mRNA水平明显下调，与空白组相比较，P值均小于0.01，差别有统计学意义；（2）维拉帕米在终浓度10μmol／L以上处理24小时者，P-gp的阳性率明显下降，与空白组相比较，差别有统计学意义；（3）分别加入丝裂霉素、替加氟和长春新碱的SGC7901／VCR细胞，维拉帕米在终浓度10μmol／L以上处理24小时后，细胞增殖率明显下降，对长春新碱、丝裂霉素及替加氟的敏感性显著增加，与空白对照相比较差别有统计学意义。4、SGC7901／VCR细胞经重组表皮生长因子（EGF）处理后，可引起（1）EGF在终浓度0.2μg／ml以上处理24小时者，TopoⅡα基因mRNA表达水平增高，与空白组相比较，差别有统计学意义；（2）EGF在终浓度0.2μg／ml以上处理24小时者，TopoⅡα蛋白阳性率增加，与空白组相比较差别有统计学意义；（3）分别加入丝裂霉素、阿霉素及柔红霉素，在EGF在终浓度0.2μg／ml以上处理24小时者，细胞增殖率明显下降，与空白对照组相比较差别有统计学意义。5、通过MTT法横向比较靶向siRNA、维拉帕米与重组表皮生长因子逆转SGC7901／VCR多药耐药的效率，结果表明三者的逆转效果没有显著性差别。结论：靶向siRNA、维拉帕米以及重组表皮生长因子在体外均有逆转人类胃癌耐长春新碱细胞SGC7901／VCR多药耐药性的作用，为开拓新型治疗胃癌的基因疗法提供参考依据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 第二章 耐药细胞系的建立与鉴定
• 第一节 实验材料
• 第二节 实验方法
• 第三节 实验结果
• 第三章 应用RNAi逆转胃癌耐VCR细胞SGC7901耐药性的比较研究
• 第一节 靶向siRNA逆转胃癌耐VCR细胞SGC7901多药耐药性
• 1.实验材料
• 2.实验方法
• 3.实验结果
• 第二节 维拉帕米逆转胃癌耐VCR细胞SGC7901多药耐药性
• 1.实验材料
• 2.实验方法
• 3.实验结果
• 第三节 重组表皮生长因子逆转胃癌耐VCR细胞SGC7901多药耐药性
• 1.实验材料
• 2.实验方法
• 3.实验结果
• 4.靶向siRNA、维拉帕米及重组表皮生长因子逆转耐药的横向比较
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢