本文主要研究内容
作者赵宁（2019）在《绵羊SP-A基因体外部分生物学功能的研究》一文中研究指出：目的:本实验在巴什拜羊和盘羊杂交羊SP-A基因表达和纯化的基础上,研究重组SP-A蛋白（rSP-A）对体外培养的绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae,MO）增殖、代谢的影响,对MO黏附作用的影响,以及对嗜酸性粒细胞（EOS）杀伤MO作用的影响。为研究rSP-A的体外生物学功能奠定基础。方法:（1）SP-A基因的表达及蛋白纯化:利用已构建好的巴什拜羊和盘羊杂交羊重组巴斯德毕赤酵母GS115/pPIC9K-SP-A阳性克隆株,甲醇诱导表达96 h,采用Ni-NTA琼脂糖亲和层析纯化,SDS-PAGE电泳检测目的蛋白。（2）rSP-A对MO增殖的影响:将不同浓度（10μg/mL,20μg/mL,40μg/mL）巴什拜羊和盘羊杂交羊的rSP-A添加于MO培养液中进行体外培养,采用平板菌落计数法观察MO菌落数,实时荧光定量PCR法检测MO 16S rRNA表达量。（3）rSP-A对MO代谢的影响:将不同浓度两种羊的rSP-A添加于MO培养液中进行体外培养,于1 d、3 d、5 d、7 d收集培养液,使用酸化法检测培养液在550nm的吸光值(OD550)。（4）rSP-A对MO黏附作用的影响:在MO与小鼠肺上皮细胞黏附过程中添加不同浓度两种羊的rSP-A,采用半数变色单位法测定黏附率,实时荧光定量PCR法检测黏附素P113基因的表达量。（5）rSP-A对EOS杀伤MO的影响:采用不连续密度梯度离心法分离羊外周血嗜酸性粒细胞,感染MO后添加不同浓度两种羊的rSP-A共同作用30 min,再将其接入平板中进行体外培养7 d,菌落计数法统计作用后菌落数。结果:（1）甲醇诱导真核载体表达后,经SDS-PAGE电泳检测在26.38kDa处出现目的条带,纯化后杂蛋白大大减少,仅出现了蛋白分子量为26.38kDa的单一条带,与预期蛋白分子量一致,说明巴什拜羊和盘羊杂交羊rSP-A表达成功,且纯化效果良好。（2）平板菌落计数结果显示,巴什拜羊10μg/mL、20μg/mL和40μg/mL实验组菌落数分别比对照组减少了8.35%（P>0.05）、23.04%（P<0.05）和40.03%（P<0.01）;盘羊杂交羊rSP-A三个实验组菌落数分别比对照组减少了6.73%（P>0.05）、21.74%（P<0.05）和37.11%（P<0.01）;实时荧光定量PCR检测结果显示,添加rSP-A培养4 h后MO 16S rRNA拷贝数降至最低,巴什拜羊3个rSP-A浓度组的拷贝数为对照组的28.85%（P<0.05）、22.19%（P<0.01）、18.51%（P<0.01）;盘羊杂交羊的3个rSP-A浓度组的MO 16S rRNA拷贝数为对照组的68.16%（P>0.05）、28.65%（P<0.01）、20.95%（P<0.01）。（3）检测培养液550nm处吸光值,结果发现:1 d时,20μg/mL组显著低于对照组（P<0.05）,40μg/mL组极显著的低于对照组（P<0.01）,从第3d开始各实验组与对照组相比均极显著降低（P<0.01）,第7 d时,巴什拜羊和盘羊杂交羊40μg/mL与对照组相比OD值分别降低了37.6%（P<0.01）和35.7%（P<0.01）。（4）b半数变色单位法显示:巴什拜羊和盘羊杂交羊40μg/mL组的MO黏附率比对照组分别减少了5.93%（P<0.05）、6.60%（P<0.05）,与对照组差异显著;Real-time qPCR法结果显示:巴什拜羊和盘羊杂交羊40μg/mL组的黏附素P113基因mRNA表达量比对照组分别下降了23.7%（P<0.01）、22.9%（P<0.01）。（5）结果表明:10μg/mL组与对照组相比EOS对MO的杀伤率分别下降了5.6%（P<0.05）和6.1%（P<0.05）,20μg/mL组比对照组分别下降了12.4%（P<0.01）、12.6%（P<0.01）,40μg/mL组比对照组下降了19.8%（P<0.01）、20.4%（P<0.01）;结论:（1）两种羊的rSP-A对体外培养的MO的增殖具有明显的抑制作用;（2）两种羊rSP-A能够显著降低体外培养的MO的代谢率;（3）较高浓度（40μg/mL）的巴什拜羊和盘羊杂交羊rSP-A能够显著抑制MO的黏附。（4）两种羊rSP-A能够显著抑制EOS对MO的杀伤。
Abstract
mu de :ben shi yan zai ba shen bai yang he pan yang za jiao yang SP-Aji yin biao da he chun hua de ji chu shang ,yan jiu chong zu SP-Adan bai （rSP-A）dui ti wai pei yang de mian yang fei yan zhi yuan ti （Mycoplasma ovipneumoniae,MO）zeng shi 、dai xie de ying xiang ,dui MOnian fu zuo yong de ying xiang ,yi ji dui shi suan xing li xi bao （EOS）sha shang MOzuo yong de ying xiang 。wei yan jiu rSP-Ade ti wai sheng wu xue gong neng dian ding ji chu 。fang fa :（1）SP-Aji yin de biao da ji dan bai chun hua :li yong yi gou jian hao de ba shen bai yang he pan yang za jiao yang chong zu ba si de bi chi jiao mu GS115/pPIC9K-SP-Ayang xing ke long zhu ,jia chun you dao biao da 96 h,cai yong Ni-NTAqiong zhi tang qin he ceng xi chun hua ,SDS-PAGEdian yong jian ce mu de dan bai 。（2）rSP-Adui MOzeng shi de ying xiang :jiang bu tong nong du （10μg/mL,20μg/mL,40μg/mL）ba shen bai yang he pan yang za jiao yang de rSP-Atian jia yu MOpei yang ye zhong jin hang ti wai pei yang ,cai yong ping ban jun la ji shu fa guan cha MOjun la shu ,shi shi ying guang ding liang PCRfa jian ce MO 16S rRNAbiao da liang 。（3）rSP-Adui MOdai xie de ying xiang :jiang bu tong nong du liang chong yang de rSP-Atian jia yu MOpei yang ye zhong jin hang ti wai pei yang ,yu 1 d、3 d、5 d、7 dshou ji pei yang ye ,shi yong suan hua fa jian ce pei yang ye zai 550nmde xi guang zhi (OD550)。（4）rSP-Adui MOnian fu zuo yong de ying xiang :zai MOyu xiao shu fei shang pi xi bao nian fu guo cheng zhong tian jia bu tong nong du liang chong yang de rSP-A,cai yong ban shu bian se chan wei fa ce ding nian fu lv ,shi shi ying guang ding liang PCRfa jian ce nian fu su P113ji yin de biao da liang 。（5）rSP-Adui EOSsha shang MOde ying xiang :cai yong bu lian xu mi du ti du li xin fa fen li yang wai zhou xie shi suan xing li xi bao ,gan ran MOhou tian jia bu tong nong du liang chong yang de rSP-Agong tong zuo yong 30 min,zai jiang ji jie ru ping ban zhong jin hang ti wai pei yang 7 d,jun la ji shu fa tong ji zuo yong hou jun la shu 。jie guo :（1）jia chun you dao zhen he zai ti biao da hou ,jing SDS-PAGEdian yong jian ce zai 26.38kDachu chu xian mu de tiao dai ,chun hua hou za dan bai da da jian shao ,jin chu xian le dan bai fen zi liang wei 26.38kDade chan yi tiao dai ,yu yu ji dan bai fen zi liang yi zhi ,shui ming ba shen bai yang he pan yang za jiao yang rSP-Abiao da cheng gong ,ju chun hua xiao guo liang hao 。（2）ping ban jun la ji shu jie guo xian shi ,ba shen bai yang 10μg/mL、20μg/mLhe 40μg/mLshi yan zu jun la shu fen bie bi dui zhao zu jian shao le 8.35%（P>0.05）、23.04%（P<0.05）he 40.03%（P<0.01）;pan yang za jiao yang rSP-Asan ge shi yan zu jun la shu fen bie bi dui zhao zu jian shao le 6.73%（P>0.05）、21.74%（P<0.05）he 37.11%（P<0.01）;shi shi ying guang ding liang PCRjian ce jie guo xian shi ,tian jia rSP-Apei yang 4 hhou MO 16S rRNAkao bei shu jiang zhi zui di ,ba shen bai yang 3ge rSP-Anong du zu de kao bei shu wei dui zhao zu de 28.85%（P<0.05）、22.19%（P<0.01）、18.51%（P<0.01）;pan yang za jiao yang de 3ge rSP-Anong du zu de MO 16S rRNAkao bei shu wei dui zhao zu de 68.16%（P>0.05）、28.65%（P<0.01）、20.95%（P<0.01）。（3）jian ce pei yang ye 550nmchu xi guang zhi ,jie guo fa xian :1 dshi ,20μg/mLzu xian zhe di yu dui zhao zu （P<0.05）,40μg/mLzu ji xian zhe de di yu dui zhao zu （P<0.01）,cong di 3dkai shi ge shi yan zu yu dui zhao zu xiang bi jun ji xian zhe jiang di （P<0.01）,di 7 dshi ,ba shen bai yang he pan yang za jiao yang 40μg/mLyu dui zhao zu xiang bi ODzhi fen bie jiang di le 37.6%（P<0.01）he 35.7%（P<0.01）。（4）bban shu bian se chan wei fa xian shi :ba shen bai yang he pan yang za jiao yang 40μg/mLzu de MOnian fu lv bi dui zhao zu fen bie jian shao le 5.93%（P<0.05）、6.60%（P<0.05）,yu dui zhao zu cha yi xian zhe ;Real-time qPCRfa jie guo xian shi :ba shen bai yang he pan yang za jiao yang 40μg/mLzu de nian fu su P113ji yin mRNAbiao da liang bi dui zhao zu fen bie xia jiang le 23.7%（P<0.01）、22.9%（P<0.01）。（5）jie guo biao ming :10μg/mLzu yu dui zhao zu xiang bi EOSdui MOde sha shang lv fen bie xia jiang le 5.6%（P<0.05）he 6.1%（P<0.05）,20μg/mLzu bi dui zhao zu fen bie xia jiang le 12.4%（P<0.01）、12.6%（P<0.01）,40μg/mLzu bi dui zhao zu xia jiang le 19.8%（P<0.01）、20.4%（P<0.01）;jie lun :（1）liang chong yang de rSP-Adui ti wai pei yang de MOde zeng shi ju you ming xian de yi zhi zuo yong ;（2）liang chong yang rSP-Aneng gou xian zhe jiang di ti wai pei yang de MOde dai xie lv ;（3）jiao gao nong du （40μg/mL）de ba shen bai yang he pan yang za jiao yang rSP-Aneng gou xian zhe yi zhi MOde nian fu 。（4）liang chong yang rSP-Aneng gou xian zhe yi zhi EOSdui MOde sha shang 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自石河子大学的赵宁，发表于刊物石河子大学2019-09-26论文，是一篇关于肺表面活性物质相关蛋白论文,绵羊肺炎支原体论文,巴什拜羊论文,盘羊杂交羊论文,体外培养论文,石河子大学2019-09-26论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自石河子大学2019-09-26论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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