论文摘要
胃癌是最常见的消化道恶性肿瘤,是一种全球性疾病。胃癌在亚洲尤其是中国的发病率很高,其死亡率在中国占恶性肿瘤死亡的第一位。胃癌缺乏特异性分子标记物,而且早期胃癌多数病人缺乏典型症状,故早期胃癌诊断率低。早期胃癌积极行手术治疗后5年生存率可达90%,而进展期胃癌5年生存率不足50%。目前胃癌研究的热点是在分子水平对胃癌的发病机制及治疗等方面进行探讨,以求早期诊断及治疗。基因组印迹又称为遗传印迹（genomic imprinting）,是近年来发现的一种不遵从孟德尔定律而依靠单亲传递某些遗传学性状的现象,是指一对同源染色体或等位基因之间存在着功能上的差异,或者活性的差别,具有这种现象的基因称为印迹基因。印迹改变是人类肿瘤最常见的遗传学改变之一。PEG10（ Paternally expressed gene 10）是2001年日本人Ono R在肝细胞癌组织中发现的父源表达的印迹基因,位于人类染色体7q21上,是一种癌基因。PEG10主要编码一种与逆转录病毒gag-pol蛋白具有高度同源性的蛋白质。PEG10在发育中的胎盘有表达,而在正常人的肝脏、胰腺、结肠、胃、淋巴细胞和表皮细胞中均没有表达。PEG10在原发性肝癌中表达明显上调,它在肝癌中表达的特异性提示可能参与肿瘤细胞生长失控。目前PEG10在胃癌中的表达及其与胃癌发生、发展的关系尚无相关研究。本研究通过逆转录聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain raction,PT-PCR）、免疫组织化学染色方法研究了PEG10在胃癌组织、癌旁组织及正常对照组织中的表达证明了从mRNA水平到蛋白质水平,胃癌组织中印迹基因PEG10表达均高于癌旁组织,正常胃组织中无PEG10表达;结合临床资料分析发现PEG10表达与胃癌的浸润深度及周围脏器侵犯密切相关,经过术后随访及生存分析发现PEG10阳性表达组生存时间明显短于PEG10阴性组,说明印迹基因PEG10对肿瘤的生长起促进作用,可以作为胃癌患者预后评估的指标之一;通过幽门螺杆菌（helicobacter pylori,Hp）嗜银染色检测胃癌组织、癌旁组织及正常对照组织Hp感染情况,与PEG10表达结合分析,证明PEG10的表达与Hp感染之间呈明显正相关。本研究克隆了PEG10基因的全长cDNA并构建其真核表达载体pcDNA-PEG10及pEGFP-PEG10,为转染人胃癌细胞,进一步研究PEG10的表达对胃癌细胞生物学行为的影响打下基础。本研究通过脂质体介导将PEG10真核表达载体转染内源性PEG10表达缺失的人胃癌细胞株MKN-45,并通过MTT比色分析法及细胞周期分析研究PEG10对于细胞的生长的影响,发现PEG10对细胞生长有明显的促进作用,对于细胞的生长周期并无影响。通过琼脂糖凝胶电泳检测转染后细胞染色体DNA断裂情况及Annexin V结合实验检测细胞凋亡发现此基因对细胞的凋亡有抑制作用。综上,通过本研究我们得出以下结论:印迹基因PEG10在胃癌组织中高表达;PEG10表达与胃癌的浸润深度及周围脏器侵犯密切相关,PEG10阳性表达组生存时间明显短于PEG10阴性组;PEG10的表达与Hp感染之间呈明显正相关;体外实验中PEG10对人胃癌细胞生长有明显的促进作用,对于细胞的生长周期并无影响;PEG10对人胃癌细胞凋亡有抑制作用。本研究为进一步了解胃癌的发生机制以及Hp如何导致细胞癌化的机理提供了一种可能的解释,为胃癌的治疗提供了方向。
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标签：基因印迹论文; 免疫组织化学染色论文; 嗜银染色论文; 胃癌论文;