枯草芽孢杆菌D221发酵条件优化及对辣椒根腐病防治效果初探

论文摘要

枯草芽孢杆菌D221是由东北农业大学农学院农药实验室从辣椒根际土壤中分离筛选得到的。通过离体和活体试验测定,该菌株对辣椒根腐病病原菌有良好的拮抗活性。本文在研究的基础上,对D221菌株的发酵条件优化、抗菌谱测定、无菌发酵液稳定性测定以及防治辣椒根腐病室内盆栽试验等进行了初步的研究,主要研究结果如下:1.对枯草芽孢杆菌D221的摇瓶发酵营养成分和发酵条件进行了优化,确定了最佳营养成分和发酵条件。试验结果表明:培养基以蔗糖2.0%,胰蛋白胨0.5%,牛肉膏2.0%,NaCl 0.5%,MgSO4 0.1%为最佳。最适的发酵条件为摇床转速150 r/min,接种量5%,初始PH为7,在250 mL三角瓶的装液量为30 mL,30℃恒温条件下发酵48 h。2.对枯草芽孢杆菌D221菌株无菌发酵液的紫外光和自然光稳定性、热稳定性、酸碱稳定性和耐储藏性进行了研究。结果表明:枯草芽孢杆菌D221发酵液对紫外光和自然光均不敏感;该发酵液在80℃以下稳定性较强,在100℃环境中,随着时间的延长,稳定性有所下降;在中性和弱酸的环境下能保持良好的抗菌活性;且耐储性较强。3.测定了枯草芽孢杆菌D221无菌发酵液的抑菌谱,发现该菌株无菌发酵液对核盘菌(Sclerotinia sclerotinorum)、尖镰孢菌(Fusarium oxysporum)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、大丽花轮枝孢(Verticillium dahliae)、麦根腐平脐蠕孢(Bipolaris sorokiniana)、大豆疫霉(Phytophthora sojae)等植物病原真菌有明显的抑制作用,为该生防菌的应用提供了依据。4.对枯草芽孢杆菌D221对辣椒根腐病的防治效果进行室内盆栽试验。试验结果表明:D221菌株发酵液对辣椒根腐病有良好的防治效果。接种辣椒根腐病前48 h、24 h和0 h以20 mL/盆浇灌D221菌株发酵液,接种病原菌7天后调查,防效分别达96.8%、88.4%和77.4%,接种14天后防效分别为80.3%、56.6%和37.5%。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 前言
• 1.1 辣椒根腐病的概述
• 1.1.1 辣椒根腐病的症状
• 1.1.2 辣椒根腐病的发生规律
• 1.1.3 辣椒根腐病的防治措施
• 1.2 植物病害的生物防治研究概况
• 1.2.1 植物病害生物防治的概念
• 1.2.2 植物病害生物防治的发展
• 1.2.3 生防细菌的主要类型
• 1.3 枯草芽孢杆菌的产品应用情况
• 1.3.1 国外生防产品的应用情况
• 1.3.2 国内生防产品的应用情况
• 1.3.3 其他方面的应用情况
• 1.3.4 枯草芽孢杆菌的生防机制
• 1.4 枯草芽孢杆菌发酵的研究
• 1.4.1 培养基对发酵的影响
• 1.4.2 其他发酵参数对发酵的影响
• 1.5 研究目的和意义
• 2 材料和方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 供试菌株
• 2.1.2 供试辣椒品种
• 2.1.3 培养基
• 2.1.4 主要仪器
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 液体种子制备
• 2.2.2 菌量与吸光度相关性的测定
• 2.2.3 无菌发酵液抑菌活性的测定
• 2.2.4 枯草芽孢杆菌D221 发酵液培养基的成分的优化
• 2.2.5 摇瓶发酵条件的优化
• 2.2.6 培养基优化后产抗菌物质的能力
• 2.2.7 D221 菌株发酵产物稳定性研究
• 2.2.8 枯草芽孢杆菌D221 无菌发酵液的抗菌谱测定
• 2.2.9 D221 菌株发酵液防治辣椒根腐病的效果
• 2.3 数据统计分析方法
• 3 结果与分析
• 3.1 D221 菌量与吸光度相关性
• 3.2 培养基营养成分对D221 菌株生长和产抗菌物质的影响
• 3.2.1 不同碳源对D221 菌株生长及抑菌活性的影响
• 3.2.2 不同氮源对D221 菌株生长及抑菌活性的影响
• 3.2.3 不同无机盐对D221 菌株生长及抑菌活性的影响
• 3.2.4 D221 菌株培养基成分的正交试验
• 3.3 发酵条件对D221 菌株生长和产抗菌物质的影响
• 3.3.1 温度对D221 菌株发酵的影响
• 3.3.2 初始PH 对D221 菌株发酵的影响
• 3.3.3 接菌量对D221 菌株发酵的影响
• 3.3.4 通气量对D221 菌株发酵的影响
• 3.3.5 摇床转速对D221 菌株发酵的影响
• 3.3.6 培养时间对D221 菌株发酵的影响
• 3.4 培养条件优化后产抗菌物质的能力
• 3.5 D221 菌株发酵产物稳定性
• 3.5.1 对紫外光和自然光稳定性测定
• 3.5.2 热稳定性测定
• 3.5.3 酸碱稳定性测定
• 3.5.4 耐储藏性测定
• 3.6 D221 菌株无菌发酵液的抗菌谱
• 3.7 枯草芽孢杆菌D221 发酵液对辣椒根腐病的盆栽防效
• 4 讨论
• 4.1 关于枯草芽孢杆菌D221 菌株培养基成分优化的问题
• 4.2 关于枯草芽孢杆菌D221 培养条件优化问题
• 4.3 关于枯草芽孢杆菌D221 对辣椒根腐病盆栽防效的问题
• 4.4 关于枯草芽孢杆菌D221 菌株防治辣椒根腐病的应用前景
• 5 结论
• 5.1 枯草芽胞杆菌D221 菌株的最佳培养基组成
• 5.2 枯草芽胞杆菌D221 菌株的摇瓶最佳发酵条件
• 5.3 枯草芽孢杆菌D221 菌株无菌滤液具有广谱抑菌活性
• 5.4 枯草芽孢杆菌D221 菌株无菌滤液具有良好的稳定性
• 5.5 枯草芽孢杆菌D221 菌株发酵液对辣椒根腐病具有良好的防治效果
• 致谢
• 参考文献
• 攻读硕士期间发表的论文