首页> 正文

miRNA靶向封闭Rac1基因诱导喉癌细胞凋亡及抑制其增殖的实验研究

2020-11-29阅读(654)

miRNA靶向封闭Rac1基因诱导喉癌细胞凋亡及抑制其增殖的实验研究

论文摘要

目的本研究旨在通过检测Rac1在喉癌中的表达来探讨Rac1在喉癌的发生及发展过程中的作用。并应用miRNA技术靶向封闭Rac1基因,观察在Rac1基因被封闭后喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡的情况,为喉癌的基因治疗寻找新的靶点,开辟一条新思路。方法1.应用免疫组织化学SP法检测喉癌组织、癌旁组织、对照组中Rac1蛋白的表达。2.应用分子生物学技术,模拟内源性miRNA,设计靶向Rac1基因的miRNA,选取3个位点构建重组质粒。然后应用脂质体Lipofectimine 2000转染人喉癌Hep-2细胞。3.应用半定量RT-PCR检测转染后Rac1 mRNA的水平,应用Western-blot检测转染pRac1miR/GFP-733重组质粒后Rac1基因的蛋白表达水平。4.观察转染后细胞生长情况,应用MTT试验观察转染的靶向Rac1的重组质粒对喉癌细胞体外增殖的影响。5.通过吖啶橙染色及流式细胞术检测喉癌细胞凋亡情况。通过细胞爬片组化染色观察Hep-2细胞的形态学变化。结果1.Rac1蛋白在对照组中无表达,在喉癌中染色阳性率为69%,显著高于癌旁组织的阳性率12%,喉癌组织与癌旁组织及对照组比较差异有显著性（均P<0.01）。2.构建的重组质粒经酶切鉴定、测序比对后证明与电脑设计的相符,表明所构建的重组质粒成功。应用脂质体转染后倒置荧光纤维镜观察转染效果,重组质粒在Hep-2细胞中成功表达。3.应用半定量RT-PCR检测转染后靶mRNA的水平,在转染后72h可检测到Rac1 mRNA的表达量下降显著,尤以转染pRac1miR/GFP-733明显,而未转染组及转染pLacZ-miR/GFP（对照）组未见此改变。应用Western-blot检测转染pRac1miR/GFP-733重组质粒Rac1基因的蛋白表达水平,发现Rac1基因的蛋白条带减弱,说明该质粒对蛋白表达有抑制作用。4.从细胞生长曲线上可以看出,转染pRac1miR/GFP-733的Hep-2细胞组的生长速度慢于Hep-2组和空质粒组,且差别具有显著性（P<0.01）。应用MTT比色法,我们测得空质粒组及Hep-2细胞组的细胞增殖强于转染pRac1miR/GFP-733的Hep-2细胞组的细胞,且差异有显著意义（P<0.01）。5.吖啶橙染色观察喉癌细胞凋亡情况,结果在正常Hep-2活细胞中可见均匀的黄绿色荧光,转染pRac1miR/GFP-733的Hep-2细胞组中可见较多的凋亡细胞呈致密浓染颗粒或块状黄绿色荧光,Hep-2和空质粒组中未见凋亡细胞。转染pRac1miR/GFP-733的Hep-2细胞组流式细胞仪检测显示,G1峰前面出现较高的亚2倍体峰（即凋亡峰）。而未转染的对照组和转染空载体组未见或仅见低平的亚2倍体峰。细胞爬片组化染色观察Hep-2细胞的形态学发现转染组中细胞大小较均匀,核浆比例明显减少,染色较淡,核形态多为圆形,可见凋亡小体。而对照组中可见细胞大小不等,外形多为梭形,多边形,核形态不规则,可含有多个核仁,胞浆黄色染色较深。结论1. Rac1在喉癌中的异常表达可能与喉癌的发生有关,Rac1可能在喉癌的发生及发展过程中发挥重要作用。2.应用miRNA靶向封闭Rac1基因的表达,发现抑制Rac1基因能诱导喉癌细胞凋亡,并抑制其生长,提示Rac1基因可以作为喉癌基因治疗的靶点,这可能为喉癌的基因治疗提供一条新的途径。

论文目录

  • 提要
  • 前言
  • 第一篇 文献综述
  • 第一章 Rho家族与恶性肿瘤
  • 第二章 Rac1与细胞凋亡的研究进展
  • 第三章 miRNA研究进展
  • 第二篇 实验研究
  • 第一章 Rac1在喉癌中的表达及意义
  • 一 材料和方法
  • 二 结果
  • 三 讨论
  • 四 小结
  • 第二章 构建miRNA-Rac1真核表达载体
  • 一 材料和方法
  • 二 结果
  • 三 讨论
  • 四 小结
  • 第三章 靶向封闭Rac1诱导喉癌细胞凋亡及抑制其增殖的体外实验
  • 一 材料与方法
  • 二 结果
  • 三 讨论
  • 四 小结
  • 结论
  • 参考文献
  • 附录
  • 攻读博士学位期间发表文章
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 致谢

    • 相关论文文献

    • [1].MMP-9基因RNAi重组慢病毒的构建及其对喉癌细胞侵袭的抑制[J]. 中国耳鼻咽喉头颈外科 2008(07)
    • [2].吲哚-3-甲醇抑制喉癌细胞体外生长的研究[J]. 中国耳鼻咽喉颅底外科杂志 2019(05)
    • [3].高表达Bcl-2下调喉癌细胞黏附能力的分子机制探讨[J]. 临床与病理杂志 2016(05)
    • [4].IFN-γ对原代喉癌细胞增殖及血管内皮生长因子-C转录的影响[J]. 中国生化药物杂志 2010(04)
    • [5].靶向阻断COX-2信号通路对喉癌细胞生长的影响[J]. 中国耳鼻咽喉颅底外科杂志 2010(06)
    • [6].新城疫病毒诱导体外培养喉癌细胞凋亡[J]. 中国老年保健医学 2011(02)
    • [7].奈达铂对喉癌细胞系放射敏感性的影响及机制[J]. 现代肿瘤医学 2016(08)
    • [8].表达超抗原葡萄球菌肠毒素A的喉癌细胞的建立[J]. 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2013(07)
    • [9].丝裂霉素对喉癌细胞生长的影响[J]. 医学理论与实践 2012(01)
    • [10].甘氨双唑钠通过影响喉癌细胞的细胞周期实现放射增敏作用[J]. 临床误诊误治 2014(09)
    • [11].抑制PAG1表达逆转喉癌细胞原发性放射抗拒机制探讨[J]. 中华肿瘤防治杂志 2017(24)
    • [12].HDAC1对喉癌细胞侵袭、迁移及血管内皮生长因子水平影响[J]. 临床和实验医学杂志 2018(17)
    • [13].反义寡核苷酸抑制整合素αv亚基表达对喉癌细胞侵袭和增殖的影响[J]. 哈尔滨医科大学学报 2010(01)
    • [14].微小RNA-144-3p靶向调控TPD52表达及对喉癌细胞凋亡和侵袭的影响[J]. 临床肿瘤学杂志 2018(11)
    • [15].siRNA干扰USP7表达对喉癌细胞生物学特性的影响[J]. 重庆医学 2016(12)
    • [16].5-氮杂-2'-脱氧胞苷对喉癌细胞中MGMT基因表达水平的影响[J]. 中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志 2009(02)
    • [17].Stat3反义核苷酸通过调节凋亡相关因子诱导喉癌细胞凋亡[J]. 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2010(04)
    • [18].葡萄籽原花青素联合顺铂对喉癌细胞Hep-2生物学作用及机制研究[J]. 临床军医杂志 2017(02)
    • [19].MicroRNA-107抑制喉癌细胞的迁移及侵袭能力的临床分析[J]. 中国耳鼻咽喉颅底外科杂志 2020(05)
    • [20].PDCD4基因在过氧化氢诱导喉癌细胞凋亡中的作用[J]. 中国组织化学与细胞化学杂志 2010(01)
    • [21].间质蛋白Periostin调控喉癌细胞生长及作用机制[J]. 现代实用医学 2019(12)
    • [22].IL-17调控IL-6/IL-6R/JAK1/STAT3信号通路影响喉癌细胞的侵袭和转移[J]. 安徽医科大学学报 2017(11)
    • [23].Stat3反义寡脱氧核苷酸在体外诱导喉癌细胞凋亡[J]. 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2008(21)
    • [24].微小RNA-203通过靶点LASP1对喉癌细胞侵袭性及凋亡的调控作用研究[J]. 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2019(02)
    • [25].原花青素通过自噬途径增强喉癌细胞对顺铂化疗敏感性的研究[J]. 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2018(06)
    • [26].长链非编码RNA GAS5调节喉癌细胞生物学行为的实验研究[J]. 临床肿瘤学杂志 2018(09)
    • [27].miR-9通过下调PTEN促进喉癌细胞的增殖效果[J]. 长春中医药大学学报 2020(05)
    • [28].锌指转录因子Snail在喉癌中的表达及其与不同亚群喉癌细胞侵袭和转移的相关性研究[J]. 中国生化药物杂志 2014(01)
    • [29].药物调控对喉癌细胞系中抑癌基因表达的影响[J]. 中国耳鼻咽喉头颈外科 2012(07)
    • [30].EGFL7基因RNAi重组慢病毒的构建及其对喉癌细胞侵袭的抑制[J]. 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2011(24)

    标签：;  ;  ;  

    miRNA靶向封闭Rac1基因诱导喉癌细胞凋亡及抑制其增殖的实验研究
    下载Doc文档

    猜你喜欢

    © 2024 毕速过 版权所有 鄂ICP备12018319号-5