前列腺素E合成酶-2在小鼠输卵管中的表达与调节

论文摘要

前列腺素E 合成酶（prostaglandin E synthase, PGES）是PGE2合成途径中的末端限速酶,可催化环氧合酶产物PGH2转化为PGE2。目前的研究表明,至少存在膜相关GSH依赖的PGES（mPGES-1）、膜相关GSH非依赖的PGES（mPGES-2）以及胞质型GSH依赖的PGES（cPGES）共三种类型。已经证实,PGES 在胚胎着床、蜕膜化、卵泡发育、黄体形成和排卵等过程中起重要作用。本实验主要利用早期妊娠、假孕、输卵管结扎、发情周期、激素调节以及延迟着床等实验模型,结合免疫组织化学和Western blot 的实验方法,详细研究了mPGES-2 蛋白在小鼠输卵管中的表达与调节。mPGES-2 蛋白主要定位于不同时期的伞部和壶腹部的上皮纤毛细胞中,在伞部和壶腹部肌层以及峡部和宫管连接处的上皮和肌层中未检测到mPGES-2 蛋白的表达。早期妊娠中,mPGES-2 蛋白在伞部各时期免疫染色程度均很强。从妊娠第1 天早到第2 天晚基本没有差异,呈较强表达。在第3、4 天强度略有提高,呈强表达,只是在第5、6 天强度降低。利用Western blot检测mPGES-2蛋白在早期妊娠输卵管中表达的结果与免疫组织化学检测伞部的结果基本一致。mPGES-2 蛋白在壶腹部的免疫染色整体稍弱于伞部。假孕过程中,mPGES-2 蛋白在输卵管伞部的免疫染色强度稍弱于早期妊娠的输卵管伞部,在各时期的免疫染色均较强,没有明显差异。输卵管壶腹部的免疫染色整体稍弱于伞部,并随时期而变化。输卵管结扎模型中,mPGES-2 蛋白在结扎后小鼠伞部和壶腹部的免疫染色弱于早期妊娠的伞部和壶腹部。发情周期中,mPGES-2 蛋白在发情间期伞部弱表达,在发情期伞部较强表达;在发情间期壶腹部不表达,在发情期壶腹部弱表达,与Western blot 检测整个输卵管的结果基本一致。激素处理模型中,mPGES-2 蛋白在对照组、雌激素处理组的伞部和壶腹部强表达,在雌激素及孕酮共同处理组较强表达,在孕酮处理组弱表达,与Western blot 检测整个输卵管的结果基本一致。在延迟着床及激活条件下,mPGES-2 在伞部和壶腹部均呈强表达,无明显差异。这些结果表明,mPGES-2 可能通过输卵管上皮细胞中合成的PGE2,间接参与输卵管中进行的受精、卵母细胞和早期胚胎的运输,以及早期胚胎发育等过程。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 输卵管的结构特点
• 1.2 输卵管液
• 1.2.1 输卵管液的主要成分
• 1.2.2 输卵管特异性糖蛋白
• 1.3 输卵管的主要功能
• 1.3.1 输卵管与卵丘卵母细胞复合体的“捕获”
• 1.3.2 输卵管中精子的迁移
• 1.3.3 输卵管与精子获能
• 1.3.4 输卵管与卵子运输
• 1.3.5 输卵管与精卵结合
• 1.3.6 输卵管与受精卵运输
• 1.3.7 输卵管与早期胚胎发育
• 1.4 前列腺素对输卵管功能的调节
• 1.4.1 PGs 在动物组织中的合成与释放
• 1.4.2 PGs 对运输的影响
• 1.4.3 PGs 对受精和胚胎发育的影响
• 1.5 前列腺素E 合成酶（PGES）
• 1.6 研究的目的和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 实验动物
• 2.2 动物模型
• 2.2.1 早期妊娠
• 2.2.2 假孕模型
• 2.2.3 输卵管结扎模型
• 2.2.4 发情周期
• 2.2.5 类固醇激素处理模型
• 2.2.6 延迟着床与延迟着床激活模型
• 2.3 Western blot 样品的制备
• 2.4 免疫组织化学
• 2.4.1 石蜡切片的制备
• 2.4.2 免疫组织化学流程
• 2.5 Western blot
• 2.5.1 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳
• 2.5.2 Western blot 的流程
• 2.5.3 显影
• 2.5.4 相关溶液的配制
• 3 实验结果
• 3.1 mPGES-2 蛋白在小鼠早期妊娠输卵管中的表达
• 3.1.1 早期妊娠输卵管中mPGES-2 蛋白的免疫染色
• 3.1.2 早期妊娠输卵管中mPGES-2 蛋白的western blot 结果
• 3.2 mPGES-2 蛋白在小鼠假孕输卵管中的表达
• 3.3 mPGES-2 蛋白在小鼠结扎后输卵管中的表达
• 3.4 mPGES-2 蛋白在小鼠发情周期输卵管中的表达
• 3.4.1 发情周期输卵管中mPGES-2 蛋白的免疫染色
• 3.4.2 发情周期输卵管中mPGES-2 蛋白的Western blot 结果
• 3.5 类固醇激素处理对mPGES-2 蛋白在输卵管中表达的影响
• 3.5.1 类固醇激素处理后输卵管中mPGES-2 蛋白的免疫染色
• 3.5.2 类固醇激素处理后输卵管中mPGES-2 蛋白的Western blot 结果
• 3.6 mPGES-2 蛋白在延迟着床及延迟着床激活输卵管中的表达
• 4 讨论
• 4.1 mPGES-2 对输卵管中胚胎运输及发育的影响
• 4.2 卵巢类固醇激素对小鼠输卵管中mPGES-2 蛋白表达及功能的调节
• 5 结论
• 参考文献
• 图版
• 攻读硕士期间公开发表论文
• 致谢