S，S-氰戊菊酯间接竞争酶联免疫吸附测定方法研究

论文摘要

合成了半抗原2-（4-氯苯基）-3-甲基丁酸-α-羧基-3-苯氧基苄酯（Efva）、2-（4-氯苯基）-3-甲基丁酸-α-（N-丁酸基）-甲酰氨-（3-苯氧基）苄酯（Efvb）、4-[2-（4-氯代苯基）-3-甲基-丁酰胺]-丁酸（Efab）。将半抗原通过混合酸酐法与卵清蛋白（OVA）偶联作为包被抗原,通过活泼酯法与牛血清蛋白（BSA）偶联作为免疫原。免疫新西兰大白兔,获得S,S-氰戊菊酯的兔抗血清。通过同源异源分析,发现异源分析的灵敏度较高。调节甲醇含量、离子强度、pH值等影响因素进行条件优化,确立了方法一中S,S-氰戊菊酯间接竞争酶联免疫分析方法的最佳检测条件为pH7.4、40%甲醇PBS溶液、Na+0.4mol/L。建立标准竞争曲线。该方法的IC50值为3.16mg/L,最低检测限IClo值为0.0053mg/L,对甲氰菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、功夫菊酯及其代谢物戊菊酸没有明显交叉反应。在自来水、河水和土壤样品中添加0.1、1、10mg/L的S,S-氰戊菊酯,其回收率范围分别为82.27%-108.21%、83.12%-109.19%、72.04-91.23%,变异系数分别为3.80%-6.20%、2.73%-7.71%、3.11%-4.69%。达到残留检测要求。确立了方法二测定S,S-氰戊菊酯间接竞争酶联免疫分析方法的最佳检测条件为pH8.4、40%甲醇PBS溶液、Na+0.4mol/L。建立标准竞争曲线。该方法的IC50值为2.24mg/L,最低检测限IC1o值为0.0052mg/L,对甲氰菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、功夫菊酯没有明显交叉反应。在自来水、河水和土壤样品中添加0.1、1、10mg/L的S,S-氰戊菊酯,其回收率范围分别为88.50%-107.69%、85.38%-108.40%、78.30%-85.88%,变异系数分别为2.67%-3.42%、5.31%-9.74%、3.91%-5.34%。达到残留检测要求。

论文目录

摘要

ABSTRACT

缩略语

第一章文献综述

1 拟除虫菊酯类农药残留检测概况

1.1 农药残留概述

1.2 拟除虫菊酯类农药概述

1.3 拟除虫菊酯类农药代谢途径

1.4 拟除虫菊酯类农药残留样品前处理方法

1.5 拟除虫菊酯类农药残留检测方法

2 拟除虫菊酯类农药酶联免疫吸附测定方法概述

2.1 农药残留酶联免疫分析技术概述

2.2 农药酶联免疫测定方法分类

2.3 拟除虫菊酯类农药酶联免疫研究进展

第二章 S,S-氰戊菊酯间接竞争酶联免疫吸附分析研究方法一

1 概述

2 实验材料与方法

2.1 仪器与试剂

2.2 半抗原的合成

2.3 人工抗原的制备与偶联比的测定

2.4 抗体的制备和纯化

2.5 抗体效价测定及工作浓度选择

2.6 异源分析

2.7 条件优化及标准抑制曲线的建立

2.8 交叉反应

2.9 添加回收率测定

3 结果

3.1 半抗原分子结构鉴定

3.2 人工抗原的鉴定及偶联比的测定

3.3 异源分析

3.4 条件优化

3.5 标准曲线的建立

3.6 交叉反应率的测定

3.7 添加回收率的测定

4 讨论

4.1 半抗原的设计

4.2 同源异源分析

4.3 条件优化

4.4 灵敏度与特异性分析

4.5 添加回收率分析

第三章 S,S-氰戊菊酯间接竞争酶联免疫吸附分析研究方法二