中国汉族iNOS基因多态性及血清iNOS活性与白癜风发病相关性研究

论文摘要

白癜风是皮肤科常见的慢性疾病,临床上以斑片状或泛发状皮肤色素脱失为特征,患者表皮皮损处黑素细胞明显减少或完全消失。白癜风的发病机制尚不清楚,不同学者就其病因及发病机理提出多种学说,如自身免疫学说、神经学说、黑素细胞自毁学说、遗传学说、黑素细胞生长因子缺乏学说等。但任何单一学说均不能完全解释白癜风的发病机理,有学者认为多因素、多基因累积共同导致了白癜风的发生,不同的个体可能存在不同病因的组合,其中遗传基因的易感性在其中占据了重要的地位。单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）是决定人类疾病（尤其是多基因疾病）易感性的主要因素,可以满足对疾病相关基因定位研究的需要,尤其是对多基因遗传性疾病高精确度基因定位的要求。因此应用SNP检测技术初步筛选白癜风可能的易感基因,为进一步寻找与定位白癜风发病密切相关基因打下基础。iNOS基因编码人类诱导型一氧化氮合酶（inducible notric oxide synthase）,在内毒素或其它细胞因子如TNF、IFN、IL-1、IL-6等诱导下, iNOS活化生成一氧化氮（NO）,一氧化氮是一种细胞间信使,近年来又被看作是一种细胞毒效应分子,可参与自身免疫病的发病,其合成和生物学效应受多种细胞因子调控。一氧化氮可能通过参与黑素细胞破坏和调节自身免疫在白癜风发病中起作用。我们推测iNOS基因单核苷酸多态性可能与汉族人群的白癜风发病有相关性,在本实验中,我们选择了位于iNOS基因启动子区改变iNOS活性的单核苷酸多态性位点,以及第16号外显子存在一个使丝氨酸（Ser）转变为亮氨酸（Leu）的C→T点突变进行分析研究,并进一步对白癜风患者血清iNOS活性水平进行检测。目的:分析iNOS基因单核苷酸多态性与中国汉族人群白癜风发病的相关性,并进行相关功能学的初步研究,探讨白癜风的遗传学背景及发病机制,为白癜风的诊断和预后提供新的指标。方法:应用病例-对照研究方法,在中国汉族人群中选取无血缘关系的白癜风患者和性别、年龄与之相配比的正常人群作为研究对象,收集外周血,提取基因组DNA,应用PCR-RFLP及MS-PCR技术,探索iNOS基因多态性位点与白癜风易感性的关系,并采用比色法检测了血清iNOS活性。结果:与iNOS-954 GG基因型相比,基因型GC有增加罹患白癜风危险性的趋势,（adjusted OR=1.35, 95% CI=1.00-1.81）;联合基因型GC+CC在白癜风患者中分布频率高于正常人群（P = 0.029）,且增加了罹患白癜风的危险性（adjusted OR=1.36, 95% CI=1.02-1.81）。在临床分型中联合基因型GC+CC与寻常型白癜风（adjusted OR=1.36, 95% CI=1.01-1.82）、活动期白癜风（adjusted OR=1.35, 95% CI=1.00-1.82）和不伴有自身免疫病的白癜风（adjusted OR=1.38, 95% CI=1.04-1.85）发病相关,与不同性别、发病年龄及是否伴有家族史的白癜风的发病相关性不显著。通过PCR-RFLP方法发现,iNOS-1173位点及E16+14位点突变的T等位基因频率在白癜风患者及正常对照组中无显著差别（P = 0.329、0.068）。进一步分析临床资料也未发现与白癜风发病的相关性。继而我们对上述iNOS三个位点进行单倍体型分析发现,单倍体基因型CCC在白癜风患者中的频率显著高于对照组,且增加了白癜风罹患的危险性（P=0.016,adjusted OR=1.44, 95% CI=1.07-1.94）。进一步检测血清iNOS活性发现,患者组血清iNOS活性（19.56±6.55 U /ml）明显高于对照组（12.82±3.35 U /ml）（P<0.05）,基因分型结果显示,携带C等位基因的人群血清中iNOS活性升高（19.39±5.36 U / ml vs. 15.54±6.16 U / ml,P<0.05）。结论:本研究首次分析了中国汉族人群中iNOS基因单核苷酸多态性和白癜风发病的相关性,发现iNOS-954位点多态性和汉族白癜风发病相关,iNOS-1173位点及E16+14位点与汉族白癜风发病无相关性,并进一步研究发现白癜风患者血清iNOS活性升高,iNOS-954位点突变后血清iNOS活性升高,进一步证明了iNOS基因多态性与白癜风发病的相关性,为研究汉族人群白癜风易感基因打下基础。由于种族差异,大样本量、不同种族的重复性研究仍十分必要。本实验研究结果支持白癜风的发病与iNOS基因相关,但其临床意义有待深入研究。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 文献回顾
• 1. 白癜风概述
• 2. iNOS基因
• 3. 基因多态性
• 正文
• 引言
• 实验材料
• 1. 实验仪器
• 2. 主要试剂
• 3. 主要试剂的配制方法
• 实验一 INOS基因多态性分析
• 1. 方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 实验二 血清INOS活性测定
• 1. 方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 小结
• 参考文献
• 附录
• 个人简历和研究成果
• 致谢