癫痫引起认知功能障碍与海马NR2B表达的变化

论文摘要

目的:癫痫是由多种原因引起的慢性脑功能障碍综合症,是神经系统常见病。癫痫患者除癫痫发作外,常伴有注意力分散、学习记忆能力减退等认知功能受损的表现。其中学习记忆能力减退是癫痫患者认知障碍中最常见的症状,越来越引起人们的重视。但是由于其机制还不清楚,所以在临床工作中还找不到行之有效的方法来防治癫痫引起的认知障碍。我们利用戊四氮（pentylenetetrazole,PTZ）慢性癫痫动物模型,观察慢性点燃癫痫大鼠脑电图和学习记忆能力的改变,并运用免疫组织化学和反转录多聚酶链反应方法观察其海马N-甲基-D-天门冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartate Receptors,NMDA）受体的2型受体（NR2）B亚单位（NMDA receptor 2B,NR2B）的表达变化,对癫痫引起的认知功能障碍的机理进行探讨,为临床实践提供理论基础。方法:1造模采用戊四氮腹腔注射慢性点燃癫痫（chronic epilepsy,CEP）模型,选取经Y迷宫筛选合格的清洁级雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠100只,实验起始质量200±20 g, 12 h光亮/黑暗条件、22～25℃环境温度,分笼喂养。随机分为两组:慢性癫痫组（chronic epilepsy group,CEP组）60只,正常对照组（normal control group,NC组）40只。CEP组大鼠每日晨8:00～9:00腹腔注射PTZ 35 mg/kg,连续30天,每天注射完毕后观察1小时。NC组大鼠给予同等剂量、同等次数的生理盐水。依据Racine分级标准将大鼠行为分为6级。0级:无任何反应;Ⅰ级:胡须动、面肌抽动;Ⅱ级:点头、咀嚼或湿狗样抖动（wet dog shakes,WDS）;Ⅲ级:一侧前肢抬起、阵挛;Ⅳ级:站立伴有双侧前肢阵挛;Ⅴ级:跌倒、全身强直阵挛性发作。完全点燃的标准是获得连续3次Ⅳ级或以上的运动惊厥。2脑电图将大鼠麻醉后固定于脑立体定位仪上,将电极放置于双侧皮质和双侧海马部位,按上述模型分组描记脑电图。3行为学检测应用Y迷宫、水迷宫、检测大鼠癫痫前后学习记忆及情感反应能力的变化。4免疫组织化学染色行为学检查后,分别随机选取模型组和对照组大鼠各8只在水合氯醛深度麻醉下灌注,取脑固定,常规包埋,标本冠状位石蜡切片。经抗原修复、羊血清封闭后,加多克隆抗体,再经二抗、三抗孵育,DAB显色后置显微镜下观察记录。5逆转录多聚酶链反应行为学检查后,分别随机选取模型组和对照组大鼠各8只,迅速分离海马,经提取海马总RNA、逆转录合成cDNA、引物扩增后,扩增产物在琼脂糖凝胶上电泳,用凝胶成像系统扫描定量并摄像电泳条带的灰度,凝胶图象分析系统分析结果。结果:1动物模型制备CEP组大鼠在连续注射第6～10天起开始出现凝视、点头、反复洗脸动作、面部及头部抽搐等,以后发作症状逐日加重,于给药第18～24天全部出现全身肌阵挛、双前肢抬起,最终发生全身强直-阵挛性发作,伴有跌倒、翻滚及流涎,达到RacineⅣ～Ⅴ级的点燃标准,继续给药至30天。NC组动物均无癫痫发作表现。2脑电图结果NC组表现为基本波动为9-11Hzα节律,低、中辐两侧对称。CEP组大鼠发作间期的脑电图表现为基本波动为低幅的9-11Hzα节律,阵发性出现痫性放电,表现为高幅多棘综合波,持续1-2秒。3行为学检测3.1水迷宫试验癫痫后,CEP组大鼠逃避潜伏期第1天与对照组比较,无显著性差异（ P>0.05）,第2天高于对照组（ P<0.05）,第3天差异更为显著（ P<0.01）。120秒内为搜寻平台而穿越平台区域的次数明显低于NG组（ P<0.01）,在平台所在象限的游泳时间与对照组比较无显著性差异（ P>0.05）。3.2 Y迷宫试验CEP组与对照组比较大鼠的错误反应次数增多（P <0.05）,但全天总反应时间,两组之间比较差异无统计学意义（P >0.05）。4免疫组化结果CEP组海马CA3区NR2B阳性神经元的数目较对照组显著减少（P <0.01）。5逆转录多聚酶链反应CEP组NR2B mRNA表达水平低于相应对照组,差异有显著性（P<0.01）。结论:1成功建立了PTZ诱发的CEP大鼠模型。2水迷宫、Y迷宫可以检测大鼠的认知能力。3癫痫引起的认知功能障碍可能与海马NR2B的表达减少有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 癫痫引起认知功能障碍与海马NR2B 表达的变化
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 NR2B与认知
• 致谢
• 个人简历