本文主要研究内容
作者尤燕舞,付冬冬,王俊杰（2019）在《利用慢病毒载体建立fractalkine基因敲低的HK-2稳定细胞株》一文中研究指出：目的利用慢病毒载体建立fractalkine(FKN)基因敲低的HK-2稳定细胞株,为探讨FKN基因在肾脏组织肾小管上皮细胞转分化(EMT)重构中的作用奠定实验基础。方法通过双酶切将FKN目的基因连接到GV248载体(hU6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin),经扩增、转化、验证、测序、质粒抽提,将携带目的基因的工具GV248载体质粒及病毒包装辅助质粒Helper1.0、Helper2.0转染293T细胞,完成慢病毒包装及质量检测后获取慢病毒工具载体LV-FKN-RNAi,病毒感染HK-2细胞72h后筛选稳定表达的细胞株HK-2/LV-FKN-RNAi,采用Western blot测定FKN的表达水平,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果经对比,构建LV-FKN-RNAi阳性克隆序列与目的基因FKN相符;HK-2细胞达到80%感染效率的最佳感染条件为:在Enhanced Infection Solution (ENi.S)培养基中进行感染,设定感染复数(MOI)为10,感染时间为72h。Western Blot结果显示,经筛选的HK-2/LV-FKN-RNAi细胞中FKN基因表达水平降低;细胞形态成梭形,多有伪足出现。CCK-8检测显示,FKN基因敲低组细胞活力降低;流式细胞术检测显示,FKN基因敲低组细胞凋亡率增加。结论本研究成功构建一种低表达FKN基因的慢病毒载体;LV-FKN-RNAi感染HK-2细胞后可实现目的基因的低表达,并且FKN基因敲低后HK-2细胞活力下降,凋亡率增加。经筛选的HK-2/LV-FKN-RNAi细胞株可用于后续实验研究。
Abstract
mu de li yong man bing du zai ti jian li fractalkine(FKN)ji yin qiao di de HK-2wen ding xi bao zhu ,wei tan tao FKNji yin zai shen zang zu zhi shen xiao guan shang pi xi bao zhuai fen hua (EMT)chong gou zhong de zuo yong dian ding shi yan ji chu 。fang fa tong guo shuang mei qie jiang FKNmu de ji yin lian jie dao GV248zai ti (hU6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin),jing kuo zeng 、zhuai hua 、yan zheng 、ce xu 、zhi li chou di ,jiang xie dai mu de ji yin de gong ju GV248zai ti zhi li ji bing du bao zhuang fu zhu zhi li Helper1.0、Helper2.0zhuai ran 293Txi bao ,wan cheng man bing du bao zhuang ji zhi liang jian ce hou huo qu man bing du gong ju zai ti LV-FKN-RNAi,bing du gan ran HK-2xi bao 72hhou shai shua wen ding biao da de xi bao zhu HK-2/LV-FKN-RNAi,cai yong Western blotce ding FKNde biao da shui ping ,CCK-8jian ce xi bao huo li ,liu shi xi bao shu jian ce xi bao diao wang lv 。jie guo jing dui bi ,gou jian LV-FKN-RNAiyang xing ke long xu lie yu mu de ji yin FKNxiang fu ;HK-2xi bao da dao 80%gan ran xiao lv de zui jia gan ran tiao jian wei :zai Enhanced Infection Solution (ENi.S)pei yang ji zhong jin hang gan ran ,she ding gan ran fu shu (MOI)wei 10,gan ran shi jian wei 72h。Western Blotjie guo xian shi ,jing shai shua de HK-2/LV-FKN-RNAixi bao zhong FKNji yin biao da shui ping jiang di ;xi bao xing tai cheng suo xing ,duo you wei zu chu xian 。CCK-8jian ce xian shi ,FKNji yin qiao di zu xi bao huo li jiang di ;liu shi xi bao shu jian ce xian shi ,FKNji yin qiao di zu xi bao diao wang lv zeng jia 。jie lun ben yan jiu cheng gong gou jian yi chong di biao da FKNji yin de man bing du zai ti ;LV-FKN-RNAigan ran HK-2xi bao hou ke shi xian mu de ji yin de di biao da ,bing ju FKNji yin qiao di hou HK-2xi bao huo li xia jiang ,diao wang lv zeng jia 。jing shai shua de HK-2/LV-FKN-RNAixi bao zhu ke yong yu hou xu shi yan yan jiu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国组织化学与细胞化学杂志的尤燕舞,付冬冬,王俊杰，发表于刊物中国组织化学与细胞化学杂志2019年03期论文，是一篇关于基因敲低论文,慢病毒载体论文,细胞论文,中国组织化学与细胞化学杂志2019年03期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国组织化学与细胞化学杂志2019年03期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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