TLR5激动剂CBLB502对A549细胞生长及辐射敏感性影响的研究

论文摘要

目的:研究TLR5受体激动剂CBLB502对肺癌A549细胞生长及辐射敏感性的作用并探索相关分子机制。方法:1、经RT-PCR、western–blot及报告基因分析方法验证A549细胞中TLR5-MyD88信号通路存在,进而利用裸鼠成瘤实验分析CBLB502对A549细胞生长及辐射敏感性的影响。2、将携带特异性干涉序列的DNA片段连接pSicoR载体中,并制备携带不同干涉序列的慢病毒颗粒。将慢病毒颗粒感染HEK293细胞,建立稳定细胞系,经RT-PCR和报告基因分析方法筛选携带有效的干涉序列的病毒颗粒。3、将筛选到的慢病毒颗粒感染A549细胞,建立稳定细胞系,经RT-PCR和报告基因分析方法验证干涉效果,进一步利用裸鼠成瘤实验分析TLR5和MyD88分子在CBLB502调节肺癌细胞生长中的作用,并对其分子机制进行探索。结果:1、A549细胞可以检测到TLR5基因mRNA的表达,并且发现CBLB502刺激A549细胞后,促进P65蛋白入核,并能有效激活NF-κB报告基因。CBLB502抑制A549细胞裸鼠体内生长,对A549细胞的辐射敏感性没有影响。2、制备针对TLR5和MyD88分子的慢病毒颗粒,以HEK293细胞为模型筛选到有效的干涉序列。3、分别建立TLR5和MyD88分子稳定下调的A549细胞系,将各细胞系接种于裸鼠皮下,22天后取肿瘤并称重,发现TLR5和MyD88分子下调A549细胞系,与pSicoR对照细胞相比,生长加快,TLR5下调组、MyD88下调组、pSicoR对照组瘤重平均值分别为705.56±252.98、327.87±82.47mg、152.86±72.99mg,进一步的分子机制研究发现,TLR5和MyD88下调细胞的肿瘤中ENA-78、IL-8及MIP-3α等基因的表达下调,中性粒细胞浸润减少,巨噬细胞、血管内皮细胞浸润没有影响。结论:1、TLR5激动剂CBLB502可以激活肺癌细胞系A549细胞TLR5-MyD88-NF-κB信号通路,并抑制A549细胞裸鼠体内生长,而不影响A549细胞的辐射敏感性。2、CBLB502抑制A549细胞生长与TLR5和MyD88分子有关,这种抑制作用与ENA-78、IL-8及MIP-3α等免疫分子分泌,影响中性粒细胞杀伤肿瘤细胞有关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一部分 CBLB502 对 A549 细胞生长及辐射敏感性的影响
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 小结
• 第二部分 TLR5 和 MyD88 干涉慢病毒颗粒的包装和鉴定
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 小结
• 第三部分 TLR5、MyD88 下调 A549 细胞系的建立及对 A549 细胞生长分析
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 小结
• 讨论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 攻读学位期间公开发表的论文
• 附录
• 致谢