论文摘要
目的:构建针对Notch-1基因的RNAi慢病毒表达载体,从转录后水平抑制Notch-1基因表达,为研究Notch-1信号通路提供技术工具;并利用构建的RNAi慢病毒感染神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,筛选出稳定转染细胞株,观察抑制Notch-1信号通路对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖的影响。方法:设计合成两对针对Notch-1 mRNA不同位点的shRNA编码序列,克隆到慢病毒穿梭质粒中,然后通过Gateway重组构建重组RNAi慢病毒表达载体;在293FT细胞中包装并进行病毒滴度测定,获得高滴度的病毒上清;慢病毒感染神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,RT-PCR和Western Blot检测构建的RNAi慢病毒对Notch-1表达的抑制效果;利用RNAi慢病毒抑制Notch-1表达,探讨Notch-1信号通路对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖的影响。结果:1、成功构建了针对Notch-1基因两个不同位点的RNAi慢病毒表达载体,经PCR和测序鉴定干扰片段的碱基序列及插入位点完全正确;2、在293FT细胞中包装,获得高滴度慢病毒上清;病毒液滴度在1.5×105TU -2.3×105TU之间,可满足后续实验需要;3、构建的两个RNAi慢病毒感染SH-SY5Y细胞后可使Notch-1mRNA表达量分别下降80%和66%;4、慢病毒感染SH-SY5Y后进行MTT检测,RNAi慢病毒组与无义干扰组和对照组相比,细胞增殖率明显下降（p<0.05或p<0.01）。结论:构建Notch-1特异的RNAi慢病毒表达载体能有效抑制Notch-1基因的表达,可以作为研究Notch-1信号通路的重要技术手段;Notch-1信号通路被抑制后对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的增殖有重要影响。
论文目录
相关论文文献
- [1].Knuckles & Notch:艺术书狂热分子[J]. 艺术与设计 2017(08)
- [2].Induction of apoptosis in renal cell carcinoma by cinobufotalin through inhibition of Notch1 signal activation[J]. Oncology and Translational Medicine 2020(05)
- [3].Effects of Notch-1 Down-regulation on Malignant Behaviors of Breast Cancer Stem Cells[J]. Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences) 2014(02)
- [4].Role of Notch signaling pathway in gastric cancer: A meta-analysis of the literature[J]. World Journal of Gastroenterology 2014(27)
- [5].Notch1 and Notch4 are markers for poor prognosis of hepatocellular carcinoma[J]. Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International 2013(03)
- [6].Effect of Trastuzumab on Notch-1 Signaling Pathway in Breast Cancer SK-BR3 Cells[J]. Chinese Journal of Cancer Research 2012(03)
- [7].Notch2 regulates matrix metallopeptidase 9 via PI3K/AKT signaling in human gastric carcinoma cell MKN-45[J]. World Journal of Gastroenterology 2012(48)
- [8].Late SV40 factor:A key mediator of Notch signaling in human hepatocarcinogenesis[J]. World Journal of Gastroenterology 2011(29)
- [9].Notch信号途径与肾细胞癌发生发展的相关性研究[J]. 中国实验诊断学 2010(07)
- [10].人肾细胞癌Notch信号途径相关基因的表达及其意义[J]. 中国实验诊断学 2010(11)
- [11].Notch信号在消化道肿瘤中的研究进展[J]. 国际消化病杂志 2010(05)
- [12].Notch在肝细胞癌中的表达及意义[J]. 南通医学院学报 2009(01)
- [13].实体瘤中Notch信号途径的研究进展[J]. 健康研究 2009(02)
- [14].Notch信号转导通路与原发性肝癌[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志 2009(05)
- [15].Lattice structure adaptive IIR notch filter based on least square kurtosis[J]. Journal of Systems Engineering and Electronics 2009(06)
- [16].Notch信号在急性早幼粒细胞白血病患者骨髓中的表达[J]. 第四军医大学学报 2009(24)
- [17].Down-Modulation of Notch1 Expression in Cervical Cancer Is Associated with HPV-Induced Carcinogenesis[J]. Clinical Oncology and Cancer Research 2009(06)
- [18].Notch信号在造血祖细胞扩增中作用的研究进展[J]. 中国实验血液学杂志 2008(05)
- [19].Notch信号调控巨噬细胞激活分子机制的研究进展[J]. 细胞与分子免疫学杂志 2014(01)
- [20].dBrms1 Acts as a Positive Regulator of Notch Signaling in Drosophila Wing[J]. Journal of Genetics and Genomics 2014(06)
- [21].急性髓性白血病患者外周血Notch信号相关基因的表达变化及意义[J]. 山东医药 2013(03)
- [22].Notch信号通路对周围T淋巴细胞活性及分化的调控作用[J]. 中国免疫学杂志 2013(07)
- [23].Notch信号通路在小儿哮喘患者外周血单个核细胞的表达及其临床意义[J]. 临床军医杂志 2012(02)
- [24].Notch信号与树突状细胞发育分化及功能调控[J]. 细胞与分子免疫学杂志 2012(11)
- [25].Optical notch filter design based on digital signal processing[J]. Optoelectronics Letters 2011(03)
- [26].骨髓间充质干细胞体外增殖及分化过程中Notch信号的表达变化[J]. 基础医学与临床 2011(11)
- [27].骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞过程中Notch表达的研究[J]. 中国组织化学与细胞化学杂志 2011(06)
- [28].Notch信号对视网膜前体细胞分化的作用[J]. 中南大学学报(医学版) 2009(06)
- [29].Influence of edaravone on Notch1 and nuclear factor-kappaB in rats with cerebral ischemia/reperfusion injury[J]. Neural Regeneration Research 2008(12)
- [30].Notch信号在中枢神经系统肿瘤中的研究进展[J]. 第四军医大学学报 2008(02)