论文题目: 斑马鱼中siRNA介导的RNA干扰及DEC1/Sharp2/Stral3基因的克隆和功能研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 遗传学
作者: 姚纪花
导师: 薛京伦
关键词: 启动子,整胚原位杂交,松果体,视网膜色素上皮,生物钟
文献来源: 复旦大学
发表年度: 2005
论文摘要: RNA干扰是指通过导入一段与内源基因同源的双链RNA序列（dsRNA），使内源mRNA降解，从而导致转录后的基因沉默。RNA干扰广泛存在于细菌、植物和动物中。脊椎动物中，长链dsRNA能引发干扰素反应而引起非特异性的mRNA降解，而21-23nt长度的siRNA能特异性介导基因的沉默，因而被广泛应用于基因功能研究。目前斑马鱼siRNA干扰方面的报道极少。本文中，我们开展了U6启动子驱动的siRNA介导的斑马鱼RNA干扰研究。选择功能明确且与表型相关的4个斑马鱼内源基因Myf5，Dlg3，Mitfa（Nacre）和Mitfb和GFP报告基因为靶基因，分别选2—4个靶位点，构建U6启动子驱动的siRNA表达载体，显微注射至斑马鱼受精卵，追踪观察胚胎发育。根据表型分析结合整胚原位杂交结果，探测siRNA对斑马鱼体内基因表达的影响。结果表明：1．)U6启动子驱动的siRNA能抑制斑马鱼靶基因的表达，但抑制作用不完全。2．)在所选的靶位点中，siGFP对斑马鱼体内的GFP表达无明显的抑制作用；3．)针对不同的靶位点，siRNA介导的干扰效果有差异。斑马鱼中siRNA介导的RNA干扰是否存在非特异性，有待进一步探索。DEC1／Sharp2／Stral3是bHLH转录因子家族成员，在哺乳动物的胚胎发育，细胞分化，增殖和凋亡过程中起重要的调控作用。DEC1参与哺乳类生物钟的调控，是哺乳类的第5类生物钟基因。本文克隆了斑马鱼的DEC1基因，进行了生物信息学分析，检测了LD周期下斑马鱼胚胎发育阶段DEC1的表达和成体眼中的DEC1表达。同时进行了DEC1的过表达和DEC1-MO反义抑制研究。结果如下：1．)斑马鱼DEC1基因的全长2743bp，编码403个氨基酸的蛋白质。BLAST分析表明，斑马鱼的DEC1与Tetraodon（CAAE01014528.1），鼠（NM011498.2），人（NM003670.1），Xenopus（BC073563.1）和Canis（AY204568.1）的同源蛋白分别具有64％、60％、59％、46％和39％的相似性。斑马鱼DEC1含有与人和鼠DEC1极其相似的保守结构域，属于bHLH转录因子DEC1的家族成员。2．)斑马鱼胚胎发育早期直到4体节期，DEC1普遍且强烈表达，随着发育的进行，DEC1在眼，体节，血岛和松果体等多种组织中表达；至Pec-fin stag（60hpf），体节等组织中的DEC1表达减弱，至Protruding-mouth stage（72hpf），DEC1的表达仅局限在松果体和视网膜色素上皮中。DEC1在斑马鱼成体眼中呈现有规律的表达。3．)斑马鱼DEC1的过表达和反义抑制都严重影响胚胎发育，造成胚胎体短，体节弯曲，心血管发育异常并且发育严重迟滞的现象。提示1．)DEC1很可能参与斑马鱼生物钟的调控，是斑马鱼中的一类生物钟基因；2．)DEC1参与斑马鱼胚胎发育过程中多种组织器官包括体节和心血管系统等的细胞分化。
论文目录:
摘要
Abstract
英文缩略词
第一部分 斑马鱼中siRNA介导的RNA干扰研究
一、前言
二、材料与方法
三、结果
四、讨论
小结
参考文献
第二部分 斑马鱼DEC1/Sharp2/Stra13基因的克隆和功能研究
一、前言
二、材料与方法
三、结果与讨论
小结
参考文献
综述
博士期间发表的部分论文
致谢
发布时间: 2007-06-28
参考文献
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