加味三棱丸抗炎镇痛作用及其机理研究

论文摘要

三棱丸最早见于《经验良方》,是由三棱、莪术两味活血化瘀中药组成。用于瘀血经闭,行经腹痛。本课题组前期有关三棱丸对子宫内膜异位症的治疗的基础研究表明:SLW可缩小异位内膜体积,三棱、莪术含药血清能抑制血管内皮生长因子（VEGF）诱导的血管内皮细胞增殖。子宫内膜异位症是一种炎症性疾病、疼痛性疾病,三棱丸是否具有抗炎镇痛作用还不得而知。本试验对三棱丸镇痛和抗炎作用进行研究,为将来将其开发成为治疗子宫内膜异位症的新药提供实验基础。目的:观察三棱丸（SLW）对疼痛和炎症动物模型的镇痛和抗炎作用,以及对炎症渗出液中前列腺素E2（PGE2）、组胺（Hist）和5-羟色胺（5-HT）含量的影响,为该制剂提供临床前研究药效学研究资料。方法:1镇痛作用试验1.1热板法筛选痛觉反应潜伏期在10～30秒的昆明种雌性小鼠,随机分为5组,分别灌胃给予三棱丸1.43mg·kg-1·d-1、0.48mg·kg-1·d-1、0.16mg·kg-1·d-1,曲马多20mg·kg-1·d-1,模型组灌胃给予生理盐水0.2 mL·10 g-1·d-1,30min后,将小鼠放在55±0.5℃热板上。测定各组小鼠痛觉反应潜伏期。1.2扭体法选择昆明种小鼠,随机分为5组,分别灌胃给予三棱丸1.43mg·kg-1·d-1、0.48mg·kg-1·d-1、0.16mg·kg-1·d-1,塞来昔布25mg·kg-1·d-1,模型组灌胃给予生理盐水0.2 mL·10 g-1·d-1,每天灌胃给药一次,连续给药3d,末次给药后30min每只小鼠均腹腔注射新鲜配制的0.7 %冰醋酸溶液0.1 mL·10 g-1。测定各组小鼠20 min内扭体反应次数。2抗炎作用试验2.1醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加实验选择昆明种小鼠,将动物分为6组,分别灌胃给予三棱丸1.43mg·kg-1·d-1、0.48mg·kg-1·d-1、0.16mg·kg-1·d-1,塞来昔布25mg·kg-1·d-1,模型组和正常组分别灌服生理盐水0.2 mL·10 g-1·d-1,每天灌胃给药一次,连续给药3d,末次给药后30min尾静脉注射0.5 %伊文斯蓝溶液0.1 mL·10 g-1,并立即腹腔注射配制的0.7 %醋酸溶液0.1 mL·10 g-1（正常组小鼠不腹腔注射醋酸溶液）,建立毛细血管通透性增加小鼠模型。测定各组小鼠腹腔内伊文斯蓝溶液浓度。2.2耳肿胀法选择昆明种小鼠,随机分为5组,分别灌胃给予三棱丸1.43mg·kg-1·d-1、0.48mg·kg-1·d-1、0.16mg·kg-1·d-1,塞来昔布25 mg·kg-1·d-1,模型组灌胃给予生理盐水0.2 mL·10 g-1·d-1,每天灌胃给药一次,连续给药3d,末次给药后30min每只小鼠均右耳廓均匀涂抹100 %二甲苯0.03 mL/只致炎,建立炎症小鼠模型。测定各组小鼠耳肿胀度。2.3大鼠足爪肿胀法选择Wistar雄性大鼠,随机分为5组,分别灌胃给予三棱丸1.02mg·kg-1·d-1、0.34mg·kg-1·d-1、0.11mg·kg-1·d-1,塞来昔布20mg·kg-1·d-1,模型组灌服生理盐水0.1 mL·10 g-1·d-1,每天灌胃给药一次,连续给药3d,末次给药后立即每只大鼠均右后足跖部皮下注射1%角叉菜胶0.1 mL/只致炎,建立炎症大鼠模型。测定各组大鼠足跖肿胀率。2.4棉球诱导大鼠肉芽组织增生实验选择Wistar雄性大鼠,将棉球（每个重30 mg±0.5 mg）分别植入大鼠两侧腹股沟皮下,建立慢性炎症大鼠模型。将造模成功大鼠分为5组,于造模成功第0d开始分别灌胃给予三棱丸1.02mg·kg-1·d-1、0.34mg·kg-1·d-1、0.11mg·kg-1·d-1,塞来昔布20mg·kg-1·d-1,模型组灌服生理盐水0.1 mL·10 g-1·d-1,每天灌胃给药一次,连续给药7d,第8d取出棉球,测定各组大鼠肉芽肿净重。3机理试验3.1大鼠角叉菜胶性炎症渗出液中PGE2含量实验选择Wistar雄性大鼠,随机分为6组,分别灌胃给予三棱丸1.02mg·kg-1·d-1、0.34mg·kg-1·d-1、0.11mg·kg-1·d-1,塞来昔布20mg·kg-1·d-1,正常组和模型组分别灌服生理盐水0.1 mL·10 g-1·d-1,每天灌胃给药一次,连续给药3d,于末次给药后立即每只大鼠右后足跖部皮下注射1%角叉菜胶0.1 mL/只致炎（正常组不在右后足跖部皮下注射角叉菜胶）,建立炎症大鼠模型。测定各组大鼠炎症足PGE2渗出量。3.2大鼠角叉菜胶性炎症渗出液中Hist含量实验选择SD雄性大鼠,随机分为6组,分别灌胃给予三棱丸1.02mg·kg-1·d-1、0.34mg·kg-1·d-1、0.11mg·kg-1·d-1,塞来昔布20mg·kg-1·d-1,正常组和模型组分别灌服生理盐水0.1 mL·10 g-1·d-1,每天灌胃给药一次,连续给药3d,于末次给药后30min每只大鼠右后足跖部皮下注射1%角叉菜胶0.1 mL/只致炎（正常组不在右后足跖部皮下注射角叉菜胶）,建立炎症大鼠模型。测定各组大鼠炎症足Hist渗出量。3.3大鼠角叉菜胶性炎症渗出液中5-HT含量实验选择SD雄性大鼠,随机分为6组,分别灌胃给予三棱丸1.02mg·kg-1·d-1、0.34mg·kg-1·d-1、0.11mg·kg-1·d-1,塞来昔布20mg·kg-1·d-1,正常组和模型组分别灌服生理盐水0.1 mL·10 g-1·d-1,每天灌胃给药一次,连续给药3d,于末次给药后30min每只大鼠右后足跖部皮下注射1%角叉菜胶0.1 mL/只致炎（正常组不在右后足跖部皮下注射角叉菜胶）,建立炎症大鼠模型。测定各组大鼠炎症足5-HT渗出量。3.4对去肾上腺小鼠耳肿胀的影响选择去肾上腺昆明种小鼠,随机分为5组,分别灌胃给予三棱丸1.43mg·kg-1·d-1、0.48mg·kg-1·d-1、0.16mg·kg-1·d-1,塞来昔布25 mg·kg-1·d-1,模型组灌胃给予生理盐水0.2 mL·10 g-1·d-1,每天灌胃给药一次,连续给药3d,末次给药后30min每只小鼠均右耳廓均匀涂抹100 %二甲苯0.03 mL/只致炎,建立炎症小鼠模型。测定各组小鼠耳肿胀度。结果:1镇痛作用试验1.1热板法SLW 1.43 mg·kg-1·d-1组的痛觉反应潜伏期较用药前明显延长,与模型组比较,差异有显著性（P﹤0.01）; SLW 0.48 mg·kg-1·d-1、0.16 mg·kg-1·d-1组的痛觉反应潜伏期较用药前有延长,但与模型组比较,差异无显著性（P>0.05）。提示SLW 1.43mg·kg-1·d-1组具有一定的镇痛作用。1.2扭体法SLW 1.43 mg·kg-1·d-1组的扭体反应潜伏期与模型组比较,差异有显著性（P﹤0.01）;SLW 1.43 mg·kg-1·d-1组与0.48 mg·kg-1·d-1组的动物在20min内的扭体次数明显减少,与模型组比较,差异有显著性（P﹤0.01）,提示SLW有抗小鼠扭体反应的作用。2抗炎作用试验2.1醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加实验模型组伊文斯蓝渗出量与正常组比较,差异有显著性（P﹤0.01）。SLW 0.16 mg·kg-1·d-1组对醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增加具有明显抑制作用,与模型组比较,差异有显著性（P﹤0.05）;SLW 1.43 mg·kg-1·d-1、0.48 mg·kg-1·d-1组对醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增加具有明显抑制作用,与模型组比较,差异有显著性（P﹤0.01）。提示SLW有抑制醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加的作用。2.2耳肿胀法SLW 0.48 mg·kg-1·d-1组可使鼠耳肿胀度显著降低,与模型组比较,差异有显著性（P﹤0.01）。提示SLW 0.48mg·kg-1·d-1组有抗小鼠耳肿胀的作用。2.3大鼠足爪肿胀法SLW 0.11 mg·kg-1·d-1组在致炎后3、4h时可使大鼠足爪肿胀度显著降低,与模型组比较,差异有显著性（致炎后3h时P﹤0.01,4h时P﹤0.05）;SLW 1.02 mg·kg-1·d-1组在致炎后2、3、4h时可使大鼠足爪肿胀度显著降低,与模型组比较,差异有显著性（致炎后2、3h时P﹤0.01,4h时P﹤0.05）;SLW 0.34 mg·kg-1·d-1组在致炎后1、2、3、4h时均可使大鼠足爪肿胀度显著降低,与模型组比较,差异均有显著性（致炎后2、3h时P﹤0.01,1、4h时P﹤0.05）。提示SLW 0.34 mg·kg-1·d-1组有较好的抗大鼠足爪肿胀的作用。2.4棉球诱导大鼠肉芽组织增生实验SLW 0.34 mg·kg-1·d-1、0.11 mg·kg-1·d-1组可明显抑制棉球诱导大鼠肉芽组织增生,与模型组比较,差异有显著性（P﹤0.05）;SLW 1.02 mg·kg-1·d-1组可明显抑制棉球诱导大鼠肉芽组织增生,与模型组比较,差异有显著性（P﹤0.01）。提示SLW能有效抑制棉球诱导大鼠肉芽组织增生。3抗炎机理试验3.1大鼠角叉菜胶性炎症渗出液中PGE2含量实验模型组炎症渗出液中PGE2含量与正常组比较,差异有显著性（P﹤0.01）。SLW 1.02mg·kg-1·d-1组和0.11 mg·kg-1·d-1组可明显抑制大鼠角叉菜胶性炎症渗出液中PGE2含量增高,与模型组比较,差异有显著性（P﹤0.05）;SLW 0.34 mg·kg-1·d-1组可明显抑制大鼠角叉菜胶性炎症渗出液中PGE2含量增高,与模型组比较,差异有显著性（P﹤0.01）。提示SLW 0.34 mg·kg-1·d-1组有较好的减少大鼠角叉菜胶性炎症渗出液中PGE2含量的作用。3.2大鼠角叉菜胶性炎症渗出液中Hist含量实验模型组炎症渗出液中Hist含量与正常组比较,差异有显著性（P﹤0.01）。SLW 1.02 mg·kg-1·d-1、0.34 mg·kg-1·d-1、0.11 mg·kg-1·d-1组均可明显抑制大鼠角叉菜胶性炎症渗出液中Hist含量增高,与模型组比较,差异有显著性（P﹤0.05）。提示SLW 1.02 mg·kg-1·d-1、0.34 mg·kg-1·d-1、0.11 mg·kg-1·d-1组有较好的减少大鼠角叉菜胶性炎症渗出液中Hist含量的作用。3.3大鼠角叉菜胶性炎症渗出液中5-HT含量实验模型组炎症渗出液中5-HT含量与正常组比较,差异有显著性（P﹤0.01）。SLW 1.02 mg·kg-1·d-1、0.34 mg·kg-1·d-1组可明显抑制大鼠角叉菜胶性炎症渗出液中5-HT含量增高,与模型组比较,差异有显著性（P﹤0.01）。提示SLW 1.02 mg·kg-1·d-1、0.34 mg·kg-1·d-1组有较好的减少大鼠角叉菜胶性炎症渗出液中5-HT含量的作用。3.4对去肾上腺小鼠耳肿胀的影响SLW 0.48 mg·kg-1·d-1组可使鼠耳肿胀度显著降低,与模型组比较,差异有显著性（P﹤0.05）。提示SLW 0.48 mg·kg-1·d-1组有抗小鼠耳肿胀的作用,并且其抗炎作用不依赖于肾上腺而存在。结论:SLW具有显著的镇痛和抗炎作用,其机制可能与减少PGE2、Hist、5-HT生成有关。

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 实验材料
• 实验方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 创新点及意义
• 思考与展望
• 参考文献
• 附图
• 文献综述
• 致谢
• 攻读硕士学位期间所发表的文章目录