论文摘要
研究背景先天性脊柱侧凸（Congenital scoliosis, CS）是指胚胎期脊椎发育异常而引起的脊柱侧凸,可在冠状面、矢状面和水平面而引起脊柱三维畸形。胚胎发育过程中一种重要的过渡性组织-“体节（somite）”决定中轴骨的形成,己证明体节发育受影响可导致脊椎畸形,包括椎体形成障碍（半椎体、楔形椎和蝴蝶椎）和椎体分节不良。椎体畸形可因发育相关基因突变所致,也可能是妊娠中环境因素或这两个因素共同作用所致,其确切病因还不清楚。目前关于CS的研究绝大多数都是针对该病的治疗,涉及病因学方面的基础研究很少。近年来,随着分子生物学和遗传学的发展,已开始了CS基因方面的初步研究,研究结果支持CS是一种多基因遗传疾病。但是还没有蛋白质组学方面的报道。因此,在蛋白质水平进一步研究CS的病因,确立CS发病及进展相关的分子标志物,从而找到有效预测和防治CS加重的方法对于该病的临床诊治具有重大意义：2D-DIGE是近年来发展的新蛋白质组技术,是目前定量蛋白质组学研究中可信度和准确性最高的技术之一。对CS进行比较蛋白质组学研究,寻找患者血清的蛋白质差异,有助于从分子水平认识CS的发生发展机制,也可以为CS的诊断和防治提供有效的分子标志物。目的1.构建CS患者与对照间血清差异蛋白质组图谱。2.应用质谱鉴定技术,对差异蛋白质点进行鉴定。3.结合蛋白功能网络研究成果,分析所鉴定的蛋白质在CS发生发展中的作用。研究方法1.采集15例胸椎畸形合并分节不良的先天性脊柱侧凸患者和15例年龄、性别匹配的无脊柱畸形的对照组患者的血清。经去高丰度蛋白、CyDye染料交叉标记,然后进行荧光双向差异凝胶电泳、图像扫描,并用DeCyder V.5.02图像分析软件对DIGE图像进行分析和寻找差异点。2.对筛选出的差异点进行基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）分析,检索IPI-HUMAN数据库鉴定蛋白。研究结果1.经过荧光双向差异凝胶电泳、DeCyder软件分析发现,先天性性脊柱侧凸患者和对照组血清中有155个蛋白质差异点,两者之间的差异有统计学意义。其中62个点在CS血清中表达上调,93个点表达下调。2.蛋白质差异点经质谱分析,IPI-HUMAN数据库鉴定出16个差异蛋白。结论1.首次对CS患者进行蛋白质组研究,成功构建CS患者与无脊柱畸形的对照组患者血清差异蛋白质组资料库。2.应用质谱鉴定技术,成功鉴定出16个差异表达蛋白质。这种蛋白质的差异表达究竟是CS发生的始动因素还是CS畸形引起的继发改变尚不能明确。其具体意义、具体作用及其是否具有CS特异性尚需进一步研究以阐明。研究结果为CS的发病和进展机制研究,筛选可作为CS诊断标记的血清标志物及药物作用靶点奠定理论基础。
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