论文题目: 人类基因SEC14L3、ACAD10和BBS4v2的克隆与功能研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 遗传学
作者: 叶鑫
导师: 毛裕民
关键词: 胆固醇合成,脂酰辅酶脱氢酶,氧化,组织表达谱,气相悬滴法,结晶
文献来源: 复旦大学
发表年度: 2005
论文摘要: 本实验室大规模的cDNA克隆与测序工作积累了大量的全长基因库。借助大量的生物信息学手段,我们试图从这些库中去筛选与重要的生理途径及人类疾病可能密切相关的基因进行研究。在此基础上我们筛选到了三条新基因并首次通过SCI期刊报道了各自的克隆与初步功能研究。这三条基因分别为SEC14L3、ACAD10和BBS4v2。 SEC14L3的cDNA全长2082bp,编码一个400个氨基酸的蛋白质。蛋白序列分析显示SEC14L3具有两个重要的功能结构域:CRAL-TRIO和GOLD结构域。信息学分析推测SEC14L3与SPF/TAP高度同源,可能为CRAL-TRIO蛋白家族的新成员。SPF/TAP在体内参与调节胆固醇合成与α生育酚代谢这两条重要的生理途径,提示SEC14L3可能具有类似的功能。组织表达谱分析显示SEC14L3主要在肝脏中表达,绿荧光融合蛋白表达显示其定位在细胞质内,初步实验表明α生育酚刺激不能引起与SPF/TAP类似的由胞质向细胞核的定位转移过程。三维结构模拟和氨基酸组成分析显示SEC14L3与SPF/TAP在疏水结合域存在关键氨基酸的差异和等电点的明显差异,提示两者之间在性质和功能上可能存在着差别。通过原核表达我们成功地分离得到了高纯度的SEC14L3蛋白CRAL-TRIO结构域部分的肽段,通过气相悬滴法对其进行了96种结晶条件的筛选,希望能够从晶体结构上对蛋白功能进行研究。 脂肪酸是人体内重要的能量物质,人体内40%左右的能量来源于脂肪酸β氧化过程。脂酰辅酶A脱氢酶正是脂肪酸β氧化过程的第一步氧化反应的催化酶。迄今发现了9类不同的脂酰辅酶A脱氢酶,在蛋白水平上都具有一个保守的脱氢酶结构域。在基因筛选过程中我们找到了一条新的脂酰辅酶A脱氢酶候选基因ACAD10。cDNA全长3960bp,编码一个1059个氨基酸长度的蛋白。序列分析与结构模拟显示其具有典型的脂酰辅酶A脱氢酶结构域,提示其作为脂酰辅酶A脱氢酶家族成员的可能性。除了这个结构域之外在靠N端具有两个相对较小的结构域:Hydrolase和APH,显示其功能上的特殊性,可能为一种多功能的蛋白质。为从结构上分析蛋白的功能,我们尝试了ACAD10及其同源蛋白LCAD、VLCAD和ACAD9的功能结构域的克隆与表达工作。 BBS4v2是我们在筛选过程中发现的一条与巴-比氏综合症可能相关的新基因,全长2530bp,编码一个527个氨基酸的蛋白质。序列比对发现其为BBS4基因的一个不同的剪接形式,两者具有不同的第一个外显子导致不同的ORF及不同的5’非翻译序列。表达谱比较发现BBS4和BBS4v2都是广谱表达,但是
论文目录:
摘要
ABSTRACT
英文缩写简表
第一章 前言
第一节 CRAL-TRIO蛋白家族研究进展(综述)
第二节 脂酰辅酶A脱氢酶家族研究概述
第三节 Bardet-Biedl综合症关联基因研究概述
第二章 材料和方法
第一节 材料和试剂
第二节 实验方法
第三章 实验结果与讨论
第一节 人类基因SEC14L3的克隆与功能研究
第二节 人类基因ACAD10的克隆与功能研究
第三节 人类基因BBS4v2的克隆与功能研究
参考文献
附录Ⅰ
附录Ⅱ
博士期间发表论文
致谢
发布时间: 2005-09-19
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