论文摘要
目的：探讨RAW264.7细胞荷脂过程中adipophilin是否与ACAT1/nCEH相互结合，阐明adipophilin引起巨噬细胞内脂质积聚的机制。方法：应用生物信息学预测adipophilin与ACAT1和nCEH是否相关；50μg/mlOx-LDL孵育RAW264.7细胞0、0.5、1、3、6h，应用油红O染色观察细胞荷脂状况；应用RT-PCR技术检测adipophilin、ACAT1和nCEH的mRNA的表达；应用WesternBlot技术检测adipophilin、ACAT1和nCEH蛋白的表达；应用免疫共沉淀技术检测adipophilin与ACAT1/nCEH是否相互结合。结果：生物信息学预测显示adipophilin与ACAT1和nCEH存在关联。油红O染色显示，与Ox-LDL孵育过程中，RAW264.7细胞内脂质显著增加。RT-PCR和westernblot显示，adipophilin、ACAT1和nCEH的mRNA和蛋白质随着时间的延长而增多，与0h表达相比，差异有显著性（P＜0.05，n=3）。免疫共沉淀显示，RAW264.7细胞与Ox-LDL孵育0h、0.5h、1h、3h时adipophilin与ACAT1结合，6h时adipophilin与ACAT1不结合；孵育0h、0.5h、1h时adipophilin与nCEH不结合，3h、6h时与nCEH结合。结论：在荷脂的RAW264.7细胞中adipophilin与ACAT1/nCEH相互结合。adipophilin在促使细胞内脂质蓄积过程中，与ACAT1/nCEH可能协同作用。