链霉菌702菌种及其产生的抗真菌活性单体组分化学结构的鉴定

论文摘要

链霉菌702是江西农业大学生物科学与工程学院应用微生物研究室从土壤中分离筛选获得的,其产生的生物活性物质对细菌和真菌均有着较强的抑制作用。本文以链霉菌702为供试菌种采用数值分类方法进行菌种鉴定,并以其发酵液为试验材料,分离纯化获得单体物质并进行结构鉴定,其方法和结果总结如下：1.链霉菌702菌种鉴定：分别以菌落和菌体形态、培养特性、生理生化特征、细胞壁化学组分以及16S rDNA序列等方法为研究手段对该菌进行分类鉴定。结果表明：该菌株菌落灰白色或黄色,产水溶性黄色素,气生菌丝发达,孢子呈卵圆形,光滑,孢子丝2-5圈紧密螺旋,细胞壁化学组分为1型,16S rDNA序列分析表明该菌株的序列与Strepomyces padanus同源性99%。结合形态观察、生理生化特性与16S rDNA序列分析结果,鉴定链霉菌702为稠李链霉菌（Streptomyces padanus）。2.链霉菌702所产抗真菌活性物质单体组分的化学结构鉴定：以链霉菌702发酵液为试验材料分别采用溶媒萃取、硅胶柱层析和制备型HPLC分离纯化和制备抗真菌活性物质单体组分DZP-9样品,并分别对其理化性质和波谱学进行测定和综合解析,鉴定其化学结构。从链霉菌702代谢产物中分离得到单体组分DZP-9多烯大环内酯抗生素,其分子式和分子量分别为C35H58O12和670Da。经鉴定为制霉色基素（Fungichromin）,该化合物具有显著的抗尖孢镰刀菌作用,其对尖孢镰刀菌古巴转换型FOC1、FOC4的EC5o和EC90分别为4.7、3.4 mg/mL和21.5、53.1mg/mL。本研究分别为该项目申报国家发明专利和进一步研发新型抗真菌制剂奠定了一定基础,在理论研究和实践应用上均有重要意义。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1 链霉菌的分类和鉴定概述
• 1.1 链霉菌属的分类地位
• 1.2 传统分类
• 1.2.1 培养特征
• 1.2.2 形态特征
• 1.2.3 生理生化特性
• 1.3 化学分类
• 1.3.1 细胞壁化学组分
• 1.4 分子分类
• 1.4.1 DNA碱基组成比例
• 1.4.2 DNA-DNA分子杂交
• 1.4.3 16SrRNA序列分析
• 1.5 多相分类研究
• 1.6 我国链霉菌分类研究现状
• 2 抗真菌抗生素
• 2.1 抗真菌类抗生素的种类和机理
• 2.2 多烯类抗生素
• 2.3 多烯类抗生素的分离提取技术研究现状
• 2.4 多烯类抗生素分析方法研究进展
• 2.5 多烯类抗生素的生物检测方法
• 3 链霉菌702的研究进展
• 3.1 链霉菌702的发现及特性
• 3.2 链霉菌702所产红谷霉素抑菌机理及发酵优化
• 3.2.1 红谷霉素对细菌抑制效果研究
• 3.2.2 红谷霉素对细菌芽孢的抑制机制
• 3.2.3 链霉菌702产红谷霉素分批发酵动力学研究
• 3.2.4 放线菌素X2高产菌株的抗药性致死突变标志的诱变筛选研究
• 3.2.5 链霉菌702菌株原生质体抗药性致死突变标志紫外诱变筛选研究
• 3.2.6 利用响应面法优化红谷霉素发酵培养基
• 3.3 链霉菌702所产新农抗702的研究进展
• 3.3.1 新农抗702对植物病原真菌的作用机制研究
• 3.3.2 新农抗702高产菌种诱变
• 3.3.3 新农抗702应用试验研究
• 3.3.4 链霉菌702发酵工艺研究
• 4 本论文研究的目的意义、内容和技术路线图
• 4.1 本论文课题来源
• 4.2 本论文研究背景和意义
• 4.3 本文主要研究内容和技术路线
• 4.3.1.链霉菌702菌种鉴定研究
• 4.3.2 链霉菌702所产抗真菌单体组分化学鉴定研究
• 4.3.3 采用的研究技术路线
• 第二章 链霉菌702菌种鉴定
• 前言
• 1.材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 供试菌种
• 1.1.2 培养基
• 1.1.3 药品试剂
• 1.1.4 仪器设备及器皿
• 1.2 方法
• 1.2.1 培养形态观察
• 1.2.2 链霉菌形态观察
• 1.2.3 链霉菌的生理生化特征
• 1.2.4 链霉菌702细胞壁组分分析
• 1.2.5 链霉菌702 G+C摩尔百分比含量测定
• 1.2.6 链霉菌702的16SrDNA序列分析
• 2 结果与分析
• 2.1 链霉菌702在9种平板培养基上菌落形态
• 2.2 链霉菌702的形态特征观察
• 2.2.1 链霉菌702插片观察
• 2.2.2 链霉菌702的电镜观察
• 2.3 链霉菌702生理生化特征
• 2.4 链霉菌702细胞壁组分分析
• 2.4.1 链霉菌702细胞壁水解液的氨基酸层析结果
• 2.4.2 链霉菌702全细胞水解液的糖层析结果
• 2.5 链霉菌702 G+C摩尔百分含量
• 2.5.1 链霉菌702基因组DNA提取电泳图谱
• 2.5.3 链霉菌702基因组DNA水解液分析结果
• 2.6 链霉菌702的16SrDNA序列分析
• 2.6.1 链霉菌702的16S rDNA扩增
• 2.6.2 链霉菌702的16SrDNA序列测定
• 3.6.3 链霉菌702的16SrDNA序列分析
• 3 小结与讨论
• 3.1 链霉菌702培养特征
• 3.2 链霉菌702形态特征
• 3.3 链霉菌702生理生化检测结果
• 3.4 链霉菌702菌体细胞壁组成检测结果
• 3.5 链霉菌702G+C摩尔百分比检测结果
• 3.6 链霉菌702菌株菌鉴定结果
• 第三章 链霉菌702所产抗真菌单体组分化学结构的鉴定
• 前言
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.1.1 指示菌
• 1.1.2 发酵液
• 1.1.3 药品试剂
• 1.1.4 仪器设备
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 抗菌活性物质的提取
• 1.2.2 抗真菌活性物质粗提物的制备
• 1.2.3 抗真菌活性物质粗品的制备--硅胶柱层析
• 1.2.4 抗真菌的DZP9单体组分的制备
• 1.2.5 制备后单体组分的纯度检测
• 1.2.6 抗真菌活性物质的分离提取、纯化技术路线
• 1.2.7 抗尖孢镰刀菌活性测定
• 2 结果
• 2.1 抗真菌活性物质单体组分DZP-9的制备
• 2.1.1 抗真菌活性物质的酒精浸提和溶媒萃取结果
• 2.1.2 抗真菌活性物质粗品的制备结果
• 2.1.3 抗真菌单体组分DZP-9样品的制备
• 2.2 抗真菌活性物质单体组分DZP-9化学结构的鉴定
• 2.2.1 抗真菌活性物质单体组分DZP-9波谱学检测结果
• 2.2.2 抗真菌活性物质单体组分DZP-9化学结构鉴定
• 2.2.3 抗尖孢镰刀菌活性
• 3 讨论
• 第四章 本文结论与展望
• 1 结论
• 1.1 链霉菌702菌种鉴定
• 1.2 抗真菌活性单体组分化学结构的鉴定
• 2 展望
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间所发表的学术论文