细菌培养和实时荧光定量PCR方法检测痰中肺炎链球菌

论文摘要

目的:慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）由于其患病率、死亡率较高已经引起了社会的高度重视,尤其是慢性阻塞性肺疾病急性加重期（AECOPD）,对疾病的临床进展意义较大。国内外调查结果显示细菌感染是引起慢性阻塞性肺疾病急性加重的主要原因,其中肺炎链球菌是重要致病菌之一。目前我国对下呼吸道感染致病菌检测的主要方法为细菌培养,但是由于部分细菌为苛养菌及抗生素滥用现象严重致使培养结果阳性率较低;而经口咳痰留取标本行细菌培养也很难区分是感染还是污染所致的阳性结果;同时细菌培养所需时间较长,也不能及时指导临床用药而使培养方法广受争议。近些年来荧光实时定量PCR（ real-time PCR）技术快速发展起来,大量的临床研究证明real-time PCR技术对于下呼吸道感染临床辅助诊断有很大帮助。本研究通过对59例AECOPD患者痰标本细菌培养、30例患者痰标本混肺炎链球菌后定量培养及51例患者痰标本real-time PCR方法检测结果的比较,来探讨细菌培养阳性率较低的原因及肺炎链球菌在慢性阻塞性肺疾病急性加重期中的作用。方法:1.用细菌培养方法检测临床收集的59例AECOPD患者痰标本中的致病菌。2.患者痰标本中混入肺炎链球菌定量培养。实验组将7个浓度梯度的肺炎链球菌与随机抽取的30例AECOPD患者痰标本混匀,接种于血平板上定量培养;对照组用同等浓度的纯肺炎链球菌菌悬液,于血平板中定量培养,比较两组培养结果。3.荧光实时定量PCR,即用肺炎链球菌质粒标准品（浓度单位为copies）检测自制的肺炎链球菌标准品（浓度单位为cfu）及临床收集的51例AECOPD患者的痰标本,比较三者之间的关系。结果:1.59例患者痰培养共分离出7种致病菌,其中包括荧光假单胞菌（7.14%）、铜绿假单胞菌（7.14%）、奇异变形杆菌为（7.14%）、肺炎克雷伯杆菌为（7.14%）、类白喉棒状杆菌（7.14%）,白色念珠菌（57.14%）,未培养出肺炎链球菌。2.用生理盐水稀释的纯肺炎链球菌菌悬液,当103cfu/ml≤浓度<10cfu/ml4时,细菌培养27/30例为阳性,其余3/30为阴性,阳性率为90%;同等浓度的肺炎链球菌混入30例患者痰标本后行细菌培养,4/30例为阳性,其余26/30均为阴性,阳性率为13%,两组实验结果有统计学差异（P<0.05）。当浓度≥104cfu/ml时,两组培养结果相同,阳性率均为100%,无统计学差异（P>0.05）。3.Real-time PCR方法检测59例标本结果:当标准品以copies为单位时,≥104copies/ml有4/51例标本（占7.8%）,其中≥106有1/51例（占2.0%）、≥105有1/51例（占2.0%）;当标准品以cfu为单位时,≥104cfu/ml共有18/51例标本（占35.3%）,其中≥106有1/51例（占2.0%）、≥105有4/51例（占7.8%）。结论:1.59例患者痰液细菌培养没有检测出肺炎链球菌,与国内外相关的文献报道有较大差异。而通过痰液混入肺炎链球菌培养与纯肺炎链球菌菌悬液培养结果比较,推断痰中的某些因素可影响肺炎链球菌生长,但具体的影响因素还有待进一步研究。2.用real-time PCR方法检测肺炎链球菌其敏感性高于细菌培养方法;通过两种浓度单位标准品测得结果的比较,认为肺炎链球菌DNA提取过程中并不能100%回收;同时也进一步说明痰液中的某些因素可影响肺炎链球菌生长,但不能解释是哪种因素影响其生长。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 附录
• 致谢