论文摘要
“十八反”是中药配伍禁忌的重要内容,许多本草著作都认为反药不可同用。但是古往今来,历朝历代,也不乏对于“十八反”持怀疑、甚至否定态度者,张仲景、孙思邈的古方中就有反药同用的实例,现代的一些医家治疗疾病过程中也会用到“十八反”中的反药。可见,目前对“十八反”是不是绝对的配伍禁忌还存在争议。细胞色素P450酶（cytochrome P450, CYP450）是人体内药物代谢过程中最主要的酶类,占药物代谢酶的75%。在人类57个P450亚型中,在药物代谢中发挥作用的CYP450主要为CYP1、CYP2、YP3家族的7种酶亚型,其中5种（CYP1A2、YP2C9.CYP2C19、 CYP2D6、CYP3A4）占P450催化药物代谢反应的约95%。CYP2E1虽然只占CYP450总量的7%,但是对药物及毒物的活性转化至关重要。致癌物在体内的代谢活化通常都是由CYP2E1和CYP1A1/2所介导的。CYP450在药物消除过程中起着十分重要的作用,同时也是联合用药过程中引起药物-药物相互作用的主要因素。本论文基于细胞色素P450酶,对“藻戟遂芫俱战草”中海藻、大戟、甘遂、芫花与甘草药物组合的相互作用进行研究,从P450酶的角度,探讨两药之间的相互作用,为“十八反”的研究提供一定的参考。由于P450亚型众多,研究选取了在药物代谢中发挥作用的主要酶类,即CYP1A2、2C19、2E1、2C9、3A。一、文献综述首先本论文对CYP450做了基本介绍,包括P450的研究进展和催化反应过程的理论,P450在降低毒性作用中发挥的作用,P450的生物活化等。二、生物样品中探针药物及其代谢物测定方法的建立本论文第二章为方法学考察部分,建立了生物样品中探针药物及其代谢物测定方法。分别为：（一）、建立血浆及微粒体中非那西丁及代谢物对乙酰氨基酚的HPLC-DAD分析测定方法,以评价CYP450 1A2酶活性；（二）、建立血浆及微粒体中奥美拉唑及代谢物5-羟基奥美拉唑的HPLC-DAD分析测定方法,以评价CYP450 2C19酶活性；（三）、建立血浆及微粒体中氯唑沙宗及代谢物6-羟基氯唑沙宗的HPLC-DAD分析测定方法,以评价CYP450 2E1酶活性；（四）、建立血浆中甲苯磺丁脲及代谢物羟基甲苯磺丁脲的HPLC-DAD分析测定方法,及微粒体中甲苯磺丁脲及代谢物羟基甲苯磺丁脲的UPLC-TQ-MS/MS分析测定方法,以评价CYP450 2C9酶活性；（五）、建立了血浆及微粒体中咪达唑仑及代谢物1’-羟基咪达唑仑的UPLC-TQ-MS/MS分析测定方法,以评价CYP450 3A酶活性。经方法学考察证明,所建方法特异性高,重现性好,回收率、精密度、稳定性等均符合生物样品的分析要求,可以用于评价P450酶活性。三、大戟与甘草药物组合对细胞色素P450酶活力的影响本部分内容主要选择“十八反”中的大戟与甘草作为研究对象,研究了大戟与甘草单用及合用对CYP 1A2、2C19、2E1、2C9、3A活性的影响。药物对P450酶活力影响的研究分为体内研究和体外研究两种方式。体内研究方式为：大鼠按组别给予上述药物诱导10天,禁食过夜后,尾静脉注射探针药物,于不同时间点采血,检测血浆中探针药物的消除和其代谢物的生成情况,评价药物对酶的影响。体外实验方式为：大鼠按组别给予上述药物诱导10天,采用差速离心法制备肝微粒体。不同组别的肝微粒体与探针药物温孵,检测探针药物代谢物的生成量,计算代谢物生成速率,评价药物对酶的影响。将体内、体外实验结果结合,综合评判药物作用。（一）大戟与甘草药物组合对CYP2C19、2E1、3A酶活力的影响经过药物诱导后,采用体内、体外相结合的方式分别评价药物对CYP1A2、2C19、 2E1、2C9、3A活力的影响。研究发现,大戟、甘草单用和合用对CYP2C19、2E1、3A活力影响不明显,体内、体外结果一致。（二）大戟与甘草药物组合对CYP1A2酶活力的影响体内、体外实验结果显示大戟水提液、大戟醇提液及甘草水提液对CYP 1A2均具有诱导作用,大戟甘草合煎液或者大戟醇提后与甘草水提液合用对CYP 1A2有诱导作用。体内实验还发现两药合用后对CYP1A2的诱导作用可能有所加强。（三）大戟与甘草药物组合对CYP2C9酶活力的影响体内研究发现甘草水提液对CYP 2C9活性无明显影响,大戟水提液或醇提液对CYP 2C9均具有诱导作用,两药合用（合煎或者大戟醇提后与甘草水提液共用）后依然对CYP 2C9有诱导作用。且甘草大戟合煎液对CYP 2C9活力诱导作用比单独给予大戟水提液或甘草水提液组均有所加强,大戟醇提液与甘草水提液合用组的酶诱导作用也均强于单用组。体外实验发现甘草水提液、大戟水提液或醇提液对CYP 2C9活力有诱导作用趋势,但未见统计学意义,甘草大戟合煎液及大戟醇提液与甘草水提液合用对CYP 2C9活力有一定的诱导作用。体内、体外实验结果相结合,发现大戟与甘草合用,其诱导CYP2C9活力作用均强于单用组。由于CYP1A2和CYP2C9参与许多临床药物的代谢,甘草与大戟合用,与单用相比CYP 1A2和CYP2C9活性受到了诱导,可能将会导致药物在体内代谢过程的改变,甚至影响机体内环境,值得进一步研究。四、海藻、甘遂、芫花与甘草相互作用研究（一）、海藻、甘遂、芫花与甘草药物组合对细胞色素P450酶活力的影响通过在体实验,以探针药物对海藻、甘遂、芫花与甘草药物组合对CYP1A2.2C19.2E1的影响进行初步研究,结果显示甘遂、芫花单用及与甘草合用均能够诱导CYP1A2,使其活性增加；海藻伍用甘草后使CYP2C19活性降低,甘遂、芫花单用及与甘草合用能够抑制CYP2C19的活性；海藻、甘遂、芫花单用及与甘草合用对CYP2E1无显著影响。（二）、甘遂毒效成分甘遂萜酯A、甘遂萜酯B代谢的研究本论文还对甘遂中毒效成分甘遂萜酯A、甘遂萜酯B的代谢进行了研究,初步探讨甘遂与甘草合用增毒的作用机理。结果显示CYP2C19可能参与了甘遂毒性成分KA、KB的代谢,甘遂与甘草合用能够抑制CYP2C19的活性,而使KA、KB的代谢减慢,产生蓄积,这可能是甘遂与甘草合用增毒的原因之一；另外,甘草中成分甘草酸和甘草次酸能够抑制KA、KB的代谢,也可能是导致甘遂与甘草合用毒性增加的原因之一。