论文摘要
目的:建立HBV基因分型芯片检测的方法,评价芯片的检测特性。方法:对大量HBV各基因型序列对比分析后,设计7支探针,用芯片点样机点样于经预处理的玻片上制成HBV基因型检测芯片;对芯片检测的实验条件进行研究探索;进行芯片质量性能的考察实验,分析其检测特性。结果:实验条件优化为:杂交温度为39℃,试验统计结果判定为软件输出荧光信号值在30以上为阳性,30以下为阴性。正常对照组的健康人和非HBV的常见病毒芯片检测结果均为阴性,实际检测10份HBV DNA阳性临床留取的验证样本,检测结果:6份为C型,4份为B型,抽查2份样本测序观察,结果与芯片检测结果完全一致。用HBV基因B型、C型标准品考察芯片的检测特性:标准品检测符合率为100%,芯片检测的最低病毒拷贝数为10~4拷贝/ml,芯片检测的总变异度为9%、芯片内变异度为2%,芯片能同时检测不同基因型的重叠感染。用加速试验评价芯片的稳定性,结果为检测信号值有所下降,但下降后的信号值未低于检测临界值30,试剂盒性能较为稳定。结论:使用HBV基因型检测芯片进行HBV基因分型操作简便、敏感性高、特异性好、方法可靠,值得推广应用。
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