论文摘要
目的研究果糖引起非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的分子机制,探讨肝脏Kupffer细胞在果糖诱发NAFLD过程的作用。方法本研究由三个实验构成。实验一、为观察饮用果糖对小鼠肝脏甘油三酯（TG）合成及脂质沉积的影响,24只雌性小鼠随机分为2组。一组饮用普通自来水,另一组饮用30%果糖水溶液,喂养8周,每周称取体重。实验二、为探讨内质网应激在果糖诱发小鼠肝脏SREBP-1c激活和脂质沉积过程的作用,48只雌性小鼠随机分为4组,即果糖组、PBA干预组、单纯PBA组和对照组。果糖组小鼠连续8周饮用30%果糖水溶液;对照组小鼠饮用普通自来水;PBA干预组小鼠饮用30%果糖水溶液6周后连续2周每天经腹腔给予PBA（100 mg/kg）;单纯PBA组最后2周每天经腹腔给予PBA（100 mg/kg）。实验三、为探讨肝脏Kupffer细胞在果糖诱发内质网应激继而导致肝脏SREBP-1c激活和脂质沉积中的作用,48只雌性小鼠随机分为4组,即果糖组、GdCl3干预组、单纯GdCl3组和对照组。果糖组小鼠连续8周饮用30%果糖水溶液;对照组小鼠饮用普通自来水;GdCl3干预组小鼠饮用30%果糖水溶液8周,每周2次经腹腔注射给予GdCl3（10 mg/kg）;单纯GdCl3组每周2次经腹腔注射给予GdCl3（10 mg/kg）。喂养8周后剖杀所有小鼠,取血清检测TG含量;取肝脏组织制备石蜡切片用于病理学检查;制备冰冻切片用于油红O染色;其它肝脏组织-80°C保存用于RT-PCR、Western Blot和肝脏TG含量检测。结果果糖组小鼠血清和肝脏TG含量显著升高;油红O染色显示,果糖组小鼠肝脏脂质沉积明显;果糖组小鼠肝脏TG合成相关酶（fas、acc、scd-1）表达水平显著上调;果糖组小鼠肝脏脂肪酸转移酶（cd36）和脂肪酸氧化相关酶（cpt1α、cyp4a10、cyp4a14）基因表达水平与对照组相比无明显差异。进一步研究发现,肝脏核蛋白SREBP-1c水平显著上升,但果糖对小鼠肝脏核蛋白ChREBP和LXRα水平无明显影响。果糖组小鼠肝脏Insig-1蛋白水平明显下调,而Insig-2蛋白水平有上升的趋势,果糖对小鼠肝脏insig-1和insig-2 mRNA水平无明显影响。果糖组小鼠肝脏grp78mRNA及蛋白水平均明显上调,PERK和eIF2α磷酸化水平明显上升,果糖组小鼠肝细胞核蛋白XBP-1水平显著升高。内质网化学小分子伴侣PBA处理明显缓解果糖引起的肝脏内质网应激和Insig-1蛋白耗损、减弱果糖引起的SREBP-1c激活及其靶基因上调。另一项实验结果显示,果糖组小鼠肝脏TNF-α和iNOS表达上调,且肝脏核蛋白NF-κB被激活,提示果糖诱导Kupffer细胞激活。Kupffer细胞抑制剂GdCl3预处理抑制果糖所致内质网应激,明显减弱肝脏SREBP-1c激活及其靶基因上调,阻止肝脏甘油三酯合成和脂质沉积。结论脂肪酸从头合成增加是果糖诱发NAFLD的主要机制。果糖引起的肝脏SREBP-1c激活导致肝细胞TG合成增加。内质网应激介导果糖诱发的小鼠肝脏SREBP-1c激活和脂质沉积,肝脏Kupffer细胞激活在果糖诱导的内质网应激中起重要作用。
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标签：果糖论文; 非酒精性脂肪性肝病论文; 固醇调节元件结合蛋白论文; 内质网应激论文; 细胞论文;