绵羊精子胞质内显微受精技术的研究

论文摘要

本研究着重探讨和研究了绵羊胞质内显微受精（ICSI）各技术环节当中一些因素对绵羊ICSI整个过程的影响,初步建立了一套比较完善的操作体系。研究结果如下:实验一,对精子DTT处理后进行ICSI,结果如下:（1）采用DTT处理与不处理的精子比较,卵裂率（79.6%、81.6%;P>0.05）没有明显差异,囊胚发育率（31.2%、20.9%;P<0.05）差异显著。实验二,分别采用活精子和死精子进行ICSI,卵裂率（80.0%、83.1%）和囊胚发育率（27.6%、20.2%）均没有显著影响（P>0.05）。实验三,为了研究激活方法对绵羊胞质内显微受精的影响,分别对卵子采用:（1）假注射,不激活;（2）注射精子,不激活;（3）假注射,Ionomysin +6-DMAP激活;（4）注射精子, Ethanol+6-DMAP激活;（5）注射精子,Ionomysin+6-DMAP激活。结果:第1、2组无论注射精子与否,都不激活,卵裂率（7.5%、5.3%）和囊胚发育率（0.94%、1.8%）都很低,差异均不显著。第3组与第4、5组比较,卵裂率（65.7%、71.6%、75.6%;P>0.05）没有明显差异,但囊胚发育率（5.7%、15.6%、26.0%;P<0.01）却明显低于4、5组。采用Ethanol+6-DMAP和Ionomysin+6-DMAP两种方法处理时,卵裂率差异不显著（71.6%、75.6%;P>0.05）,但囊胚发育率前者要显著低于后者（15.6%、26.0%;P<0.05）。实验四,本实验对显微注射时对第一极体位置进行分析,发现第一极体位于6点和12点位置,卵裂率（82.4%%、85.8%;P>0.05）和囊胚发育率（28.8%、26.9%;P>0.05）没有显著影响。实验五,精子操作液中PVP浓度分别为10%、8%和5%时,卵裂率（80.2、83.6%、72.0%;P<0.05）和囊胚发育率（27.8%、30.5%、16.0%;P<0.05）均差异显著。实验六,在培养液中添加VEGF和不添加,卵裂率（78.7%%、83.9%;P>0.05）和囊胚发育率（27.7%、23.6%;P>0.05）没有显著影响。实验七,操作液中添加CB和不添加CB,卵裂率（77.5%、74.7%;P>0.05）没有显著影响,但添加CB的囊胚发育率（29.2%、14.3%;P<0.05）却显著高于对照组。实验八,对显微注射时的温度进行分析,恒温和室温条件下,卵裂率（80.1%、90.6%;P<0.05）,差异显著,囊胚发育率（31.3%、28.2%;P>0.05）没有显著影响。实验九,显微注射时间在4h以前注射卵裂率（84.7%、86.0%、80.6%;P>0.05）没有显著影响。01h注射的囊胚发育率要显著高于12h注射的,并极显著高于3-4h的（33.6%、18.3%、13.0%;P<0.05-0.01）。1-2h与34h注射的囊胚发育率(18.3%、13.0%;P>0.05没有明显差异。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩写一览表
• 第一章：文献综述
• 一 前言
• 二 国内外概况:
• 三 影响 ICSI 的的因素
• 四 ICSI 在羊上的研究进展
• 五 问题与争议
• 六 应用与展望
• 第二章：试验研究
• 1 材料与方法
• 2 试验设计
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 第三章：结论
• 参考文献
• 附图
• 附录1 攻读学位期间参加的主要科研项目
• 附录2 攻读学位期间的研究成果
• 致谢
• 作者简历
• 导师评阅表