桦褐孔菌子实体中α-葡萄糖苷酶抑制成分的提取分离研究

论文摘要

α-葡萄糖苷酶抑制剂可以竞争性抑制小肠内α-葡萄糖苷酶的活性,延缓葡萄糖在肠道内的吸收,从而有效地降低餐后的高血糖,目前已被广泛用于糖尿病的防治。食用菌是一大类具有很高食用及药用价值的高等真菌,由于真菌代谢产物具有多种结构类型及生理活性,因此是寻找新的天然药物的重要来源。本文首先测定了十三种食用菌提取物在一定浓度下的α-葡萄糖苷酶抑制活性,以最大抑制率计,抑制强度为桦褐孔菌>针裂蹄>香菇。其半抑制浓度分别为：桦褐孔菌提取物0.015mg/mL,针裂蹄提取物0.038mg/mL,香菇提取物2.2mg/mL,与阳性对照阿卡波糖的半抑制浓度4.2mg/mL相比,桦褐孔菌提取物、针裂蹄提取物分别为阿卡波糖的280倍和110倍,而香菇提取物为阿卡波糖的2倍。在与其他十三种食用菌的α-葡萄糖苷酶抑制活性比较基础上,采用生物活性指导下的导向分离方法,将桦褐孔菌子实体按所含成分极性的不同进行分部提取,结果石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、乙醇剩余提取物、乙醇提取物及粗多糖部分对酶活性抑制的IC50值分别为0.35mg/mL,0.25mg/mL,0.12mg/mL,0.15mg/mL,0.4mg/mL和0.024mg/mL。表明桦褐孔菌粗多糖部分相比其他部分对α-葡萄糖苷酶有更强的抑制效果。通过单因素及正交试验对桦褐孔菌多糖提取的影响因素进行了研究,对影响的主次顺序为：料液比>温度>时间,提取的最佳条件为：料液比1：20,提取温度为100℃,提取时间是2h。并对分级醇沉的桦褐孔菌粗多糖进行α-葡萄糖苷酶抑制活性作用比较,其中60%醇沉组分的效果最好,其IC50值为10μg/mL,且得率高、溶解性较好,因此对其进一步分离纯化。经离子柱层析、凝胶柱层析分离纯化得到IO11、IO12、IO2三个多糖活性组分,分别测定其对α-葡萄糖苷酶的抑制活性,结果显示纯化后的组分对α-葡萄糖苷酶的抑制活性都较原液高,其中组分I011的抑制效果最明显。对不同浓度的组分IO11溶液测定其α-葡萄糖苷酶抑制率,可以得出其IC50值约为8μg/mL。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 符号说明
• 第一章 绪论
• 1.1 桦褐孔菌研究概况
• 1.1.1 桦褐孔菌的分类学地位
• 1.1.2 桦褐孔菌的形态及生物学特性
• 1.1.3 桦褐孔菌的化学成分
• 1.1.4 桦褐孔菌的药理学研究
• 1.2 糖尿病概述
• 1.2.1 糖尿病的简介
• 1.2.2 糖尿病的分类及致病机理
• 1.2.3 糖尿病的药物治疗
• 1.2.4 糖尿病的危害
• 1.3 α-葡萄糖苷酶抑制剂的研究进展
• 1.3.1 α-葡萄糖苷酶及其抑制剂简介
• 1.3.2 α-葡萄糖苷酶抑制剂的作用机理
• 1.3.3 α-葡萄糖苷酶抑制剂的研究现况
• 1.4 本文研究的意义及主要内容
• 第二章 十余种食用菌提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性筛选
• 2.1 引言
• 2.2 实验材料
• 2.2.1 原料
• 2.2.2 主要试剂
• 2.2.3 主要实验仪器
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 食用菌提取物的预处理
• 2.3.2 PNP标准曲线的制作
• 2.3.3 α-葡萄糖苷酶活性测定
• 2.3.4 α-葡萄糖苷酶抑制剂活性测定
• 2.3.5 半抑制浓度的确定
• 2.4 结果与讨论
• 2.4.1 PNP标准曲线
• 2.4.2 阿卡波糖抑制α-葡萄糖苷酶活性IC5α的确定
• 2.4.3 食用菌提取液抑制α-葡萄糖苷酶活性的比较
• 2.5 本章小结
• 第三章 桦褐孔菌子实体的α-葡萄糖苷酶抑制活性部位确定
• 3.1 引言
• 3.2 实验材料
• 3.2.1 原料
• 3.2.2 主要试剂
• 3.2.3 主要实验仪器
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 桦褐孔菌子实体的分部提取
• 3.3.2 分部提取物抑制α-葡萄糖苷酶活性研究
• 3.4 结果与讨论
• 3.4.1 石油醚提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制效果
• 3.4.2 乙酸乙酯提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制效果
• 3.4.3 正丁醇提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制效果
• 3.4.4 乙醇提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制效果
• 3.4.5 剩余乙醇提取物部分对α-葡萄糖苷酶的抑制效果
• 3.4.6 粗多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制效果
• 3.5 本章小结
• 第四章 桦褐孔菌多糖的分离纯化及α-糖苷酶抑制活性研究
• 4.1 引言
• 4.2 实验材料
• 4.2.1 原料
• 4.2.2 主要试剂
• 4.2.3 主要实验仪器
• 4.3 实验方法
• 4.3.1 桦褐孔菌多糖提取工艺流程
• 4.3.2 桦褐孔菌多糖提取工艺优化
• 4.3.3 分级醇沉桦褐孔菌粗多糖
• 4.3.4 多糖含量测定
• 4.3.5 蛋白含量测定
• 4.3.6 桦褐孔菌粗多糖的纯化
• 4.3.7 HPLC法测定多糖的分子量分布
• 4.4 结果与讨论
• 4.4.1 多糖提取单因素实验
• 4.4.2 多糖提取正交实验
• 4.4.3 多糖标准曲线
• 4.4.4 蛋白质标准曲线
• 4.4.5 分级醇沉桦褐孔菌粗多糖组分抑制α-葡萄糖苷酶活性比较
• 4.4.6 不同离子交换剂对纯化桦褐孔菌粗多糖的影响
• 4.4.7 桦褐孔菌多糖的分离纯化及对α-葡萄糖苷酶抑制作用结果
• 4.5 本章小结
• 第五章 结论与展望
• 5.1 结论
• 5.2 展望
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文