南丰蜜橘种质离体保存及遗传稳定性研究

论文摘要

限制生长保存是植物种质离体保存的一种主要方法,限制生长保存是在保证植物种质遗传完整性的前提下限制试管苗的生长,减少继代次数,达到中期保存植物种质资源的目的。本研究以南丰蜜橘大果-97种子和杨小-26成年态茎段为实验材料,对南丰蜜橘成年态茎段的离体培养以及南丰蜜橘限制生长保存的方案进行了探索,初步建立起适合南丰蜜橘种质离体保存的技术方法。主要试验结果如下:1.以南丰蜜橘杨小-26成年态茎段为材料,在不同激素配比的MS培养基进行再生芽的诱导和继代增殖培养,确定了最佳的诱导培养基MS+6-BA0.5mg/L +KT0.5 mg/L+NAA0.1 mg/L,把诱导培养基中的蔗糖浓度由3%提高到6%可以很好的解决再生芽的叶片发黄、脱落问题;再生芽增殖的最佳培养基为MS+6-BA0.4 mg/L+ZT0.1mg/L+NAA0.05mg/L,增殖系数可达5.40。2.通过正交试验对供试材料保存4个月后的存活率与封口材料、温度和光照强度的关系进行优选,初步得到南丰蜜橘适宜的保存条件为牛皮纸+2层聚乙烯膜封口,18℃,400 lx弱光照条件下保存。3.不同培养基养分与蔗糖浓度影响了南丰蜜橘离体保存的效果。结果表明,低浓度无机盐、高浓度蔗糖可抑制南丰蜜橘保存材料的生长,在1/4MS+60g/L蔗糖的培养基中,南丰蜜橘大果-97种子试管苗保存效果最好,6个月的保存成活率可达92%,而杨小-26成年态茎段保存培养基中的最佳蔗糖与无机盐量为1/2MS+60g/L蔗糖。4.不同种类、浓度的生长抑制剂的保存实验结果表明,南丰蜜橘保存中适宜的生长抑制剂为PP333且浓度以1mg/L为宜,附加1mg/L PP333的MS培养基中保存的种子试管苗与成年态茎段成活率分别达到100%和78%,显著高于其他处理。5.对恢复培养后的保存苗进行了形态学观察,以及蛋白质和过氧化物同工酶电泳,结果与对照无明显差异,说明保存了6个月的南丰蜜橘种质保持了良好的遗传稳定性,初步证明以上保存方法的可行性。

论文目录

• 缩略词表
• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1.1 问题的提出
• 1.2 前人的研究进展
• 1.2.1 植物种质离体保存方法的研究
• 1.2.2 植物种质离体保存后遗传稳定性检测
• 1.2.3 柑橘离体保存的研究进展
• 1.3 本研究的内容及意义
• 第二章 南丰蜜橘离体增殖无性系的建立
• 2.1 种子实生苗离体无性系培养
• 2.2 成年态营养体离体增殖无性系培养
• 2.2.1 试验材料
• 2.2.2 试验方法
• 2.2.3 结果与分析
• 2.2.4 结论与讨论
• 第三章 不同培养条件对南丰蜜橘离体保存的研究
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 方法
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 南丰蜜橘种子试管苗的保存成活率
• 3.2.2 南丰蜜橘成年态带芽茎段的保存成活率
• 3.3 结论与讨论
• 第四章 不同培养基养分及蔗糖对南丰蜜橘离体保存的研究
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 方法
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 不同浓度蔗糖对种子试管苗保存效果的影响
• 4.2.2 不同培养基养分对种子试管苗保存效果的影响
• 4.2.3 不同浓度蔗糖对成年态保存苗保存效果的影响
• 4.2.4 不同培养基养分对成年态保存苗保存效果的影响
• 4.2.5 保存后种子试管苗恢复培养效果
• 4.2.6 保存后成年态苗恢复培养效果
• 4.3 结论与讨论
• 第五章 不同生长抑制剂对南丰蜜橘离体保存的研究
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 材料
• 5.1.2 方法
• 5.2 结果与分析
• 333 对南丰蜜橘种子试管苗保存效果的影响'>5.2.1 PP₃₃₃对南丰蜜橘种子试管苗保存效果的影响
• 333 对南丰蜜橘成年态保存苗保存效果的影响'>5.2.2 PP₃₃₃对南丰蜜橘成年态保存苗保存效果的影响
• 5.2.3 CCC 对南丰蜜橘种子试管苗保存效果的影响
• 5.2.4 CCC 对南丰蜜橘成年态保存苗保存效果的影响
• 5.2.5 ABA 对南丰蜜橘种子试管苗保存效果的影响
• 5.2.6 ABA 对南丰蜜橘成年态保存苗保存效果的影响
• 5.2.7 不同生长抑制剂处理后保存苗的恢复培养效果
• 5.3 结论与讨论
• 第六章 南丰蜜橘离体保存后的遗传稳定性检测
• 6.1 材料与方法
• 6.1.1 材料
• 6.1.2 方法
• 6.2 结果与分析
• 6.2.1 形态特征比较
• 6.2.2 可溶性蛋白SDS-PAGE 电泳分析
• 6.2.3 POD 同工酶电泳结果
• 6.3 结论与讨论
• 第七章 全文结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 在学期间公开发表论文（著）及科研情况